[发明专利]L‑脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及氨基醇对映异构体的分离检测方法，具体涉及L-脯氨醇对映异构体的分离检测方法，属于分析化学领域。

背景技术

L-脯氨醇是重要的手性化学试剂，既是合成优良光学材料NPP和手性聚合物材料的原料，又是合成手性药物的重要手性源。其化学名为(S)-pyrrolidin-2-ylmethanol，其结构式如下所示：

L-脯氨醇的对映异构体为D-脯氨醇，其结构式如下所示：

通常在手性药物及其制剂产品的制备和生产过程中，需要对其对映异构体的含量进行研究和控制。而合成手性化合物的手性源的对映异构体含量的研究和控制进一步保证了手性药物及其制剂产品的光学纯度。现代色谱分离分析技术在对映体的分离与测定方面显示出巨大的优越性。常用的手性药物测定技术有手性高效液相色谱法、手性毛细管电泳法和手性气相色谱法等，其中以手性高效液相色谱法最为常用。手性高效液相色谱法又包括手性固定相法、手性流动相添加剂法和手性衍生化法。

作为手性合成重要的手性源，L-脯氨醇的对映异构体的检测和控制是手性药物控制对映异构体的重要控制步骤，一方面可以保证目标手性药物的光学纯度，另一方面减少了手性药物光学纯化的成本，例如手性药物阿伐那非的合成。

手性高效液相色谱法是最为普遍的方法，但是由于脯氨醇几乎无紫外吸收，故需要将其衍生化为有较强紫外吸收的化合物，利用高效液相色谱仪在正相色谱柱上进行分离。

发明内容

本发明的目的在于提供一种实用方便、稳定可靠的手性衍生化高效液相色谱法来分离和检测L-脯氨醇及其对映异构体，可用于L-脯氨醇中对映异构体的分离检测和质量控制。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种L-脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法，是在有机溶剂中，使用衍生化试剂和L-脯氨醇及其异构体进行衍生化反应，制备得到L-脯氨醇及其异构体的衍生化产品，然后使用正相高效液相色谱法进行分离和检测。

上述衍生化试剂选自乙酰扁桃酰氯、9-氯甲酸芴甲酯和氯甲酸苄酯中的一种，优选9-氯甲酸芴甲酯。

上述有机溶剂可以是下列溶剂中的一种或多种：二氯甲烷、乙腈、氯仿、四氯化碳、四氢呋喃，优选乙腈。

上述衍生化反应的温度从-10℃到所使用有机溶剂的常压沸点温度均可，优选室温。

上述衍生化反应中，当使用9-氯甲酸芴甲酯作为衍生化试剂时，L-脯氨醇及其异构体与衍生化试剂9-氯甲酸芴甲酯用量的摩尔比为1∶1～1∶5，优选1∶1.1～1∶1.5。

在本发明的一些实施例中，衍生化反应包括以下步骤：

1)室温下，在反应器中加入C1～C4的有机胺和L-脯氨醇及其异构体，C1～C4的有机胺与L-脯氨醇及其异构体的摩尔比为5∶1～1∶1，加入有机溶剂，搅拌均匀；

2)在步骤1)得混合物中加入衍生化试剂，搅拌反应5～60min，即得到L-脯氨醇及其异构体的衍生化产品。其中，反应时间优选30min。

优选的，所述C1～C4的有机胺选自三乙胺、二乙胺和二异丙基乙胺中的一种或多种。

C1～C4的有机胺在此处用作缚酸剂，用于中和反应中产生的酸，采用C1～C4的有机胺的原因在于，相比于无机碱来说，它能溶于有机溶液。

上述步骤2)所用衍生化试剂优选为9-氯甲酸芴甲酯，L-脯氨醇及其异构体与9-氯甲酸芴甲酯用量的摩尔比优选为1∶1.1～1∶1.5。

上述正向高效液相色谱以正相色谱柱为分离柱，以正己烷-C1～C4低级醇组成正相流动相系统。

所述正相色谱柱优选以硅胶表面涂敷有直链淀粉－(二甲苯基氨基甲酸酯)或表面涂敷有纤维素－(二甲苯基氨基甲酸酯)为固定相的手性色谱柱，更优选硅胶表面涂敷有直链淀粉－三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)为固定相的色谱柱。

所述正相流动相系统中的低级醇优选C1～C4的一元醇，更优选异丙醇和/或乙醇，最优选异丙醇。

所述正相流动相系统中低级醇占流动相的体积百分比为10％～30％，优选15％～25％。

进一步的，色谱条件优选为：流速为0.7～1.3mL/min，优选为0.8mL/min；检测波长为255nm-275nm，优选为265nm；色谱柱柱温为25℃～40℃，优选为35℃。

在本发明的一些具体实施例中，按照以下步骤进行正相高效液相色谱法，实现L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品的分离检测：