[发明专利]液固相结合合成富勒烯双加成多肽的方法

权利要求书

1.一种富勒烯双加成多肽，其特征在于结构式如下：

其中P为RGD肽、TISWPPR 肽或PHLATLF 肽。

2.根据权利要求1所述的富勒烯双加成多肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）N-取代富勒烯双加成吡咯烷与只有一个活性羧基的酸性氨基酸在DCC、HOBT和DMAP的存在下，在氮气保护下，用液相合成法进行缩合反应，室温避光搅拌反应24~72小时，反应结束后，硅胶柱层析分离纯化得到氨基和羧基均被保护的富勒烯双加成氨基酸；

（2）将氨基和羧基均被保护的富勒烯双加成氨基酸加入TFA/DCM的混合溶液中，室温搅拌反应0.5~12h，经脱保脱除羧基保护基得到仅含氨基保护基的富勒烯双加成氨基酸；

（3）将仅含氨基保护基的富勒烯双加成氨基酸溶于DMF/DCM混合溶剂中，然后加入树脂-多肽、HBTU、HOBT和DIEA，在室温下用固相合成法进行缩合反应，产物经脱保、裂解得到富勒烯双加成多肽；

以上各个步骤均在无水无氧的条件下进行；

所述步骤（1）中的只有一个活性羧基的酸性氨基酸为天冬氨酸或谷氨酸；

所述步骤（3）中的树脂-多肽为树脂-RGD肽、树脂-TISWPPR 肽或树脂-PHLATLF 肽。

3.根据权利要求1所述的富勒烯双加成多肽的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中N-取代富勒烯双加成吡咯烷、只有一个活性羧基的酸性氨基酸、DCC、HOBT和DMAP的物质的量之比为0.05-0.2:2:2:2:0.2。

4.根据权利要求1所述的富勒烯双加成多肽的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中TFA/DCM的混合溶液中TFA和DCM的体积比为0.2-9:1。

5.根据权利要求1所述的富勒烯双加成多肽的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中仅含氨基保护基的富勒烯双加成氨基酸、树脂-多肽、HBTU、HOBT和DIEA的物质的量之比为2:1-6:4:4:8。

6.根据权利要求1所述的富勒烯双加成多肽的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中DMF/DCM混合溶剂中DMF和DCM的体积比为1:1。

7.根据权利要求1所述的富勒烯双加成多肽的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）在室温下用固相合成法进行缩合反应是在140 r/min的条件下振荡8-24h。

8.根据权利要求1所述的富勒烯双加成多肽的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中脱保所用试剂为哌啶/DMF的混合溶液，其中哌啶和DMF的体积比为1:4，在室温、140 r/min的条件下振荡15~30min。

9.根据权利要求1所述的富勒烯双加成多肽的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中裂解所用试剂为TFA/TIS/H₂O的混合溶液，其中TFA、TIS和H₂O 的体积比为95:2:3，在室温、140 r/min的条件下振荡2-4 h。

10.根据权利要求1所述的富勒烯双加成多肽的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中裂解后，用冷乙醚沉淀法得到富勒烯双加成多肽。