[发明专利]一种林蛙油抗氧化多肽

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白多肽领域，具体涉及了一种林蛙油抗氧化多肽。

背景技术

林蛙油，俗称蛤蟆油或雪蛤膏，《本草纲目》记载：哈士蟆，《本草纲目》中称之“山哈”，别名哈士蟆、雪蛤。现今被命名为中国林蛙。主要生长在中国东北山区，包括长白山脉，小兴安岭大部，张广才岭腹地，纯野生动物，亦被称为哈什蚂(哈士蟆)，是东北地区特有的蛙种，其雌蛙输卵管的干燥物称之为“雪蛤油”，具有补虚润肺、强身健体的功效，自古在民间就被誉为与东北三宝齐名的传世滋补佳品。千百年来广为人们应用，其药理作用亦早已为人所知。林蛙油是雌蛙怀卵成熟期的输卵管，其含有大量氨基酸、无机元素、维生素和多种复合多肽等生物活性因子，特别富含三种性激素，即雌二醇、睾酮、孕酮，具有在医学上有“软黄金”之称，具有显著的滋阴强肾激发免疫功能和调节机理作用，广泛用于食品、保健品和化妆品等领域。

目前，以林蛙油为原料加工而成的护肤产品，由于蛋白的分子量过大而不易被人体吸收。采用常规的一步酶解法进行酶解后，得到的多肽分子量不均一，且小分子量的多肽含量少，依然无法实现营养物质的高效利用。因此，亟需提供一种能够被人体吸收的、抗氧化效果好的林蛙油多肽。

发明内容

本发明的目的为克服现有技术的缺陷，提供一种以林蛙油为原料提取而成的抗氧化多肽，该所述多肽的分子量小，且拥有优异抗氧化活性，具有广泛的应用前景。

本发明提供了一种林蛙油抗氧化多肽，所述抗氧化多肽以林蛙油为原料，由包括以下步骤的方法制备而成：

1)取林蛙油，去除筋膜，加入2～10倍于林蛙油体积的水，置于2～4℃泡发8～12h，得林蛙油溶液；

2)调节步骤1)所得林蛙油溶液的pH值为1.6～1.8，加入0.1～0.3g/ml胃蛋白酶，在35～40℃下充分酶解，得胃蛋白酶解液；

3)调节将步骤2)所得胃蛋白酶解液的pH值为6.0～7.0，加入0.2～0.4g/ml中性蛋白酶，在45～55℃下充分酶解，得中性蛋白酶解液；

4)调节步骤3)所得中性蛋白酶酶解液的pH值为7.0～8.0，加入0.2～0.4g/ml菠萝蛋白酶，在55～60℃下充分酶解，得菠萝酶解液；

5)将步骤4)所得菠萝酶解液加热至70～75℃，静置10～15min，使酶灭活，得酶解液；

6)取步骤5)所得酶解液，使用0.3～0.4μm的滤膜过滤，收集滤液，再使用截留分子量为4～5kD的超滤膜过滤，收集滤液，加入活性炭室温低速搅拌1～3h后，过滤除去活性炭，真空浓缩，喷雾干燥，即得林蛙油抗氧化多肽。

本发明使用的林蛙油可为市售的林蛙油，优选为新鲜的林蛙油。为了使林硅油中的蛋白充分分解成小分子多肽，本发明采用胃蛋白酶-中性蛋白酶-菠萝蛋白酶的多步酶解，具体而言：

本发明步骤2)中，所述胃蛋白酶的比活为3000～5000U/g，加入量优选为0.2g/ml，酶解温度优选为38℃；酶解应充分，但若时间过长则会对多肽活性产生影响，酶解时间优选为4～5h，进一步优选为4.5h；

本发明步骤3)中，所述中性蛋白酶的比活为40000～70000U/g，加入量优选为0.3g/ml，酶解温度优选为50℃；酶解应充分，但若时间过长则会对多肽活性产生影响，酶解时间优选为3～4h，进一步优选为3.5h；

本发明步骤4)中，所述菠萝蛋白酶的比活为600000～900000U/g，加入量优选为0.3g/ml，酶解温度优选为58℃；酶解应充分，但若时间过长则会对多肽活性产生影响，酶解时间优选为2～3h，进一步优选为2.5h。

作为优选方案，本发明所述林蛙油抗氧化多肽由包括以下步骤的方法制备而成：

1)取林蛙油，去除筋膜，加入2～10倍于林蛙油体积的水，置于2～4℃泡发8～12h，得林蛙油溶液；

2)调节步骤1)所得林蛙油溶液的pH值为1.6～1.8，加入酶的比活为3000～5000U/g的0.1～0.3g/ml胃蛋白酶，在35～40℃下酶解4～5h，得胃蛋白酶解液；

3)调节将步骤2)所得胃蛋白酶解液的pH值为6.0～7.0，加入酶的比活为40000～70000U/g的0.2～0.4g/ml中性蛋白酶，在45～55℃下酶解3～4h，得中性蛋白酶解液；

4)调节步骤3)所得中性蛋白酶酶解液的pH值为7.0～8.0，加入酶的比活为600000～900000U/g的0.2～0.4g/ml菠萝蛋白酶，在55～60℃下酶解2～3h，得菠萝酶解液；