[发明专利]一种检测水体重金属镉的微生物学方法有效
| 申请号： | 201410842170.4 | 申请日： | 2014-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN104946681B | 公开（公告）日： | 2019-05-07 |
| 发明（设计）人： | 吕建新;吕攀攀;王伍;卢彬彬;林炜炜 | 申请（专利权）人： | 温州医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12Q1/686;C12Q1/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 325035 浙江省温州市瓯海经济*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 水体 重金属 微生物学 方法 | ||
1.一株大肠埃希氏菌WMC-009的应用，其特征在于所述大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)WMC-009 CGMCC No.9747应用于水体重金属镉的检测。
2.根据权利要求1所述的一株大肠埃希氏菌WMC-009的应用，其特征在于所述大肠埃希氏菌WMC-009通过如下方法获得：采用Red重组系统敲除赋予野生型大肠埃希氏菌镉抗性的zntA和zntR基因，然后采用基因敲入技术将pmerR-MerR(M)-pmerR-gfpmut2报告基因置换到zntR编码基因位置后获得；基因MerR(M)序列为SEQ ID NO.5所示，启动子pmerR序列为SEQ ID NO.4所示，荧光报告基因gfpmut2序列为SEQ ID NO.3所示。
3.根据权利要求1所述的一株大肠埃希氏菌WMC-009的应用，其特征在于大肠埃希氏菌WMC-009菌株的构建方法如下：
3.1采用Red重组系统敲除赋予野生型大肠埃希氏菌镉抗性的zntA和zntR基因，获得大肠杆菌ΔzntAΔzntR菌株；
3.2设计zntR基因N末端和C末端的内侧引物和外侧引物以及pmerR-MerR(M)-pmerR-gfpmut2融合基因的引物，采用交叉PCR技术构建含有融合基因pmerR-MerR(M)-pmerR-gfpmut2与zntR基因的两端同源臂的融合基因片段；
3.3将含有融合基因pmerR-MerR(M)-pmerR-gfpmut2与zntR基因的两端同源臂的融合基因片段zntRNo-Ni-pmerR-MerR(M)-pmerR-gfpmut2-zntRCi-Co连接到pKOV载体上，构建融合报告载体pKOV-zntRNo-Ni-pmerR-MerR(M)-pmerR-gfpmut2-zntRCi-Co；zntR基因N端同源臂基因zntR-N序列为SEQ ID NO.26所示，zntR基因C端同源臂基因zntR-C序列为SEQ ID NO.27所示；
3.4将所述重组载体pKOV-zntRNo-Ni-pmerR-MerR(M)-pmerR-gfpmut2-zntRCi-Co转入到步骤3.1的大肠杆菌ΔzntAΔzntR菌株中，通过两次同源重组，将pmerR-MerR(M)-pmerR-gfpmut2报告基因置换到步骤3.1大肠杆菌ΔzntAΔzntR菌株基因组中的zntR编码基因位置。
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