[发明专利]一种火麻蛋白ACE抑制肽的制备方法

权利要求书

1.一种火麻蛋白ACE 抑制肽的制备方法，其特征在于，包括以下几个步骤：

步骤A ：火麻仁蛋白质的提取：称取脱脂火麻仁粕，干燥，粉碎，过筛去除杂质，加水至固定料液比，用胶体磨进行匀浆，过筛，调节 pH 值，超声波辅助提取，恒温碱提蛋白，等电点沉淀，离心除去上清液，沉淀进行第二次碱提蛋白，加水至固定料液比，用均质机进行均质，过筛，调节 pH 值，等电点沉淀，离心除去上清液，中和，干燥得到火麻仁分离蛋白；

步骤B ： 火麻仁蛋白肽的定向酶解制备：将火麻仁分离蛋白加入去离子水，调节 pH值，加入混合蛋白酶，恒温酶解，沸水浴灭酶，离心取上清液；

步骤C ：火麻仁蛋白ACE 抑制肽的纯化制备： 将火麻仁蛋白酶解液分离纯化，将收集所得火麻仁蛋白ACE 抑制肽进行冷冻干燥，即制得高纯度火麻仁蛋白ACE 抑制肽；

步骤A 中，匀浆后的物料过400 目筛，均质后的物料过600 目筛；匀浆温度为25℃，胶体磨间隙为在0.1-1mm，匀浆时间为5-10min ；均质温度为55-65℃、均质压力为5-30MPa，均质次数为2-3 次；

步骤B 中，加酶量为4500-8000U/g，底物质量浓度6-16%，温度为45-55℃，pH=8-9.5，酶解时间为2-4h；混合蛋白酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶，所述混合质量比为 1-2 ：1-3 ：1-3；

所述步骤C 包括以下几个步骤：

步骤1） 火麻水解蛋白肽脱盐采用大孔吸附树脂，制备型层析柱，层析条件为：室温25-30℃， 火麻水解蛋白肽上样浓度为50-100mg /mL，上样流速为100-200mL/h，上样结束后用去离子水洗涤层析柱，当电导率降至与去离子水相当时，采用75% 的乙醇进行解吸，收集洗脱液，真空旋转蒸发浓缩蒸去乙醇；

步骤2）采用凝胶过滤层析色谱分离纯化脱盐火麻水解蛋白肽，色谱条件为：色谱柱填料：SephadexG-15 凝胶，脱盐火麻水解蛋白肽的上样浓度100-200mg/mL， 缓冲液为pH=8.0-8.5 的碳酸氢铵缓冲液溶解，洗脱流速4-8 mL /min，收集洗脱体积40-400 mL 的组分，真空冷冻干燥，即为纯化火麻蛋白ACE 抑制肽。

2.一种火麻蛋白ACE 抑制肽的制备方法，其特征在于，包括以下几个步骤：

步骤A ：火麻仁蛋白质的提取：称取脱脂火麻仁粕，干燥，粉碎，过筛去除杂质，加水至固定料液比，用胶体磨进行匀浆，过筛，调节 pH 值，超声波辅助提取，恒温碱提蛋白，等电点沉淀，离心除去上清液，沉淀进行第二次碱提蛋白，加水至固定料液比，用均质机进行均质，过筛，调节 pH 值，等电点沉淀，离心除去上清液，中和，干燥得到火麻仁分离蛋白；

步骤B ： 火麻仁蛋白肽的定向酶解制备：将火麻仁分离蛋白加入去离子水，调节 pH值，加入混合蛋白酶，恒温酶解，沸水浴灭酶，离心取上清液；

步骤C ：火麻仁蛋白ACE 抑制肽的纯化制备： 将火麻仁蛋白酶解液分离纯化，将收集所得火麻仁蛋白ACE 抑制肽进行冷冻干燥，即制得高纯度火麻仁蛋白ACE 抑制肽；

步骤A 中，匀浆后的物料过400 目筛，均质后的物料过600 目筛；匀浆温度为25℃，胶体磨间隙为在0.1-1mm，匀浆时间为5-10min ；均质温度为55-65℃、均质压力为5-30MPa，均质次数为2-3 次；

步骤B 中，加酶量为4500-8000U/g，底物质量浓度6-16%，温度为45-55℃，pH=8-9.5，酶解时间为2-4h；混合蛋白酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶，所述混合质量比为 1-2 ：1-3 ：1-3；

所述步骤C 包括以下几个步骤：

步骤1）火麻水解蛋白肽脱盐采用纳滤膜分离装置，脱盐条件为：操作压力：

0.5-0.8MPa，料液浓度为5-10ug/mL，pH =8-8.5、温度为35℃ ；

步骤2） 采用超滤装置分离纯化脱盐火麻水解蛋白肽，一级超滤采用5KD 的膜过滤组件进行超滤，压力0.4-0.5MPa，温度30℃，料液浓度50-80mg/ml，取滤过液进行二级超滤，二级超滤采用1KD 的膜过滤组件进行超滤，压力0.5-0.6MPa，温度30℃，取浓缩液，真空冷冻干燥，即为纯化火麻蛋白ACE 抑制肽。