[发明专利]一种火麻蛋白ACE抑制肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物活性肽技术领域，尤其涉及一种火麻蛋白ACE抑制肽的制备方法。

背景技术

目前，国内对火麻仁的研究和利用主要集中在火麻仁油的提取和利用上，火麻仁油富含亚油酸，α-亚麻酸和油酸和类花生酸，对于恢复人体的免疫系统所引起的慢性疾病和辅助治疗有帮助。在国内，一直以来都是将火麻仁榨油，渣滓用作动物饲料，造成大量的资源浪费。随着对火麻蛋白营养功能的进一步认识，已有企业和科研人员开始利用榨取油脂后的火麻渣滓进行产品加工，但多限制于饮料等产品的研究中。

火麻仁中蛋白质的含量约为 25%，含有 20 种已知氨基酸，其中包括 9 种人体必需氨基酸。火麻仁蛋白质主要含麻仁球蛋白和麻仁白蛋白，火麻仁蛋白中 80％为麻仁球蛋白(esedstin) ，20％约为白蛋白（albumin）。麻仁球蛋白含有酸性亚基和碱性亚基，相对无磷，用火麻仁蛋白进行的体外试验，即用胃蛋白酶水解后接着用胰蛋白酶水解，结果表明麻球蛋白易于消化，其必需氨基酸要比大豆分离蛋白高出很多。火麻仁蛋白所含必需氨基酸足以满足 2-5 岁儿童的生长发育需要。因此麻仁蛋白是一种十分优异的植物蛋白新资源。而且火麻仁所含的麻仁球蛋白和人类血浆的球蛋白极其相似，麻仁球蛋白可作为人体血浆的组成成分。火麻仁蛋白质有相当高含量的精氨酸，是大豆蛋白的约 1.5 倍。同时，有比较高含量的组氨酸，与大豆蛋白和葡萄籽蛋白很接近，精氨酸和组氨酸对儿童期的生长非常重要，同时精氨酸能在体内转化为一氧化氮，具有扩张血管，降低血压，保持血管畅通且有弹性的作用，精氨酸可以治疗高血压、肝昏迷、肝硬化等，西方国家用精氨酸来预防和治疗心血管疾病已经比较成熟，在许多功能性食品中添加了L-精氨酸。因此，如何实现火麻蛋白的工业化生产更是国内外学者的研究热点。

发明内容

目前来说，抑制ACE 成为控制血压升高的有效途径。但是，目前化学ACE 抑制剂副作用大，而生物ACE 抑制剂由于采用生物酶法存在生产条件要求高、生产工艺复杂、设备价格昂贵。

为了解决上技术问题，本发明提供一种火麻蛋白ACE抑制肽的制备方法，包括以下几个步骤：

步骤A：火麻仁蛋白质的提取：称取脱脂火麻仁粕，干燥，粉碎，过筛去除杂质。加水至固定料液比，用胶体磨进行匀浆，过筛，调节 pH 值，超声波辅助提取，恒温碱提蛋白，等电点沉淀，离心除去上清液，沉淀进行第二次碱提蛋白，加水至固定料液比，用均质机进行均质，过筛，调节 pH 值，等电点沉淀，离心除去上清液，中和，干燥得到火麻仁分离蛋白；

步骤B： 火麻仁蛋白肽的定向酶解制备：将火麻仁分离蛋白加入去离子水，调节 pH 值，加入混合蛋白酶，恒温酶解，沸水浴灭酶，离心取上清液；

步骤C：火麻仁蛋白ACE抑制肽的纯化制备： 将火麻仁蛋白酶解液分离纯化，将收集所得火麻仁蛋白ACE抑制肽进行冷冻干燥，即制得高纯度火麻仁蛋白ACE抑制肽。

优选的，所述步骤A中，超声波辅助处理采用温度 20~30℃，作用功率 120~200W，占空比为 20：20s/s， 时间为 40~80 min。

优选的，所述步骤A中，碱提的条件是 pH=8~9.5，提取温度45~55℃，料液比 1：10~20 g/mL，提取时间为40~80min。

优选的，所述步骤A中，离心速度为5000~6000 r/ min， 离心时间为10~20 min。

优选的，步骤B中，混合蛋白酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶，所述混合质量比为1~2：1~3：1~3。

优选的，步骤B中，加酶量为4500~8000U/g，底物质量浓度6~16%，温度为45~55℃，pH=8~9.5，酶解时间为2~4h。

优选的，步骤B中，离心速度为7000~8000r/min，离心时间为5~10 min。

优选的，步骤A中，匀浆后的物料过400目筛，均质后的物料过600目筛；匀浆温度为25℃，胶体磨间隙为在0.1~1mm，匀浆时间为5~10min；均质温度为55~65℃、均质压力为5~30MPa，均质次数为2~3次。

优选的，所述步骤C包括以下几个步骤：

步骤1） 火麻水解蛋白肽脱盐采用大孔吸附树脂，制备型层析柱，层析条件为：室温25~30℃， 火麻水解蛋白肽上样浓度为50~100mg /mL，上样流速为100~200mL/h，上样结束后用去离子水洗涤层析柱，当电导率降至与去离子水相当时，采用体积分数为体积分数为75%的乙醇进行解吸，收集洗脱液，真空旋转蒸发浓缩蒸去乙醇；