[发明专利]构建稳定表达细胞池并进行蛋白表达生产的方法

权利要求书

1.一种构建稳定表达细胞池并进行蛋白表达生产的方法，其特征在于，包括步骤：

在宿主细胞中筛选一株稳定表达报告基因的母细胞株，然后，运用特异重组酶介导的靶 向插入技术在母细胞株中进行外源表达基因和报告基因的置换，以此来构建稳定表达细胞池 并进行外源蛋白表达和生产。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法的具体步骤包括：

1)在宿主细胞中引入报告基因，通过对报告基因的筛选，获得稳定表达报告基因的母细 胞株；

2)将需要表达的外源表达基因进行标记，并克隆进一个独立的载体，作为交换载体；

3)通过上述交换载体和FLP酶表达载体在母细胞株中的共转染，在FLP酶的调控下， 实现外源表达基因和报告基因间的置换，从而构建了稳定表达的细胞池并能进行外源蛋白表 达和生产。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，宿主细胞为CHO-K1宿主 细胞。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，引入报告基因的个数优选 为1个。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，报告基因的两端由一对异 种特异性的FLP-recombinasetargetsites来标记。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，标记的方法采用步骤1) 中的一对异种特异性的FLP-recombinasetargetsites来标记。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，外源表达基因包括：外源 抗体蛋白表达基因。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，载体包括：质粒。