[发明专利]一种降低酸性变体含量的CHO细胞培养工艺在审
| 申请号： | 201410856248.8 | 申请日： | 2014-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN104560882A | 公开（公告）日： | 2015-04-29 |
| 发明（设计）人： | 黎美香;鄢成伟;杨彬;孙文正;李文佳;倪健;苏彦景;柯军 | 申请（专利权）人： | 广东东阳光药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋;杨晞 |
| 地址： | 523808 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 降低 酸性 变体 含量 cho 细胞培养 工艺 | ||
1.一种CHO表达系统的细胞培养工艺，包括如下步骤：
(1)添加基础培养基总体积的40％-60％于培养反应器中；
(2)在培养的第1天和第2天分别补加基础培养基总体积20％-30％；
(3)在培养的第3天加入当天培养体积7.5％-12.5％的CHO CD Efficient FeedTMA和CHO CD Efficient FeedTMB的混合物；
(4)第5天加入当天培养体积10-15％的CHO CD Efficient FeedTMA、CHO CD Efficient FeedTMB和CHO CD Efficient FeedTMC的混合物；
(5)在培养的第7天加入当天培养体积2-4.5％的Acti CHO Feed A和当天培养体积0.2-0.45％的Acti CHO Feed B；
(6)在培养的第9天加入当天培养体积1.5-4％的Acti CHO Feed A和当天培养体积0.15-0.4％的Acti CHO Feed B；
(7)在培养的第11天收获目的蛋白。
2.根据权利要求1所述的培养工艺，其特征在于，所述CHO表达系统为基于重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的CHO表达系统。
3.根据权利要求1所述的培养工艺，其特征在于，所述基础培养基为CD FortiCHO、TFS-RDMP-1、TFS-RDMP-9或Hycell CHO。
4.根据权利要求1所述的培养工艺，其特征在于，步骤(1)中基础培养基为CD FortiCHO。
5.根据权利要求1所述的培养工艺，其特征在于，步骤(2)中第1天和第2天分别补加的基础培养基为Hycell CHO。
6.根据权利要求1所述的培养工艺，其特征在于，步骤(3)中CHO CD Efficient FeedTMA和CHO CD Efficient FeedTMB的体积比为1:1。
7.根据权利要求1所述的培养工艺，其特征在于，步骤(4)中CHO CD Efficient FeedTMA、CHO CD Efficient FeedTMB和CHO CD Efficient FeedTMC的体积比为1:1:1。
8.根据权利要求1所述的培养工艺，其特征在于，包括如下步骤：
(1)添加基础培养基总体积的50％于培养反应器中；
(2)在培养的第1天和第2天分别补加基础培养基总体积的25％；
(3)在培养的第3天加入当天培养体积10％的CHO CD Efficient FeedTMA和CHO CD Efficient FeedTMB的混合物；
(4)第5天加入当天培养体积12.5％的CHO CD Efficient FeedTMA、CHO CD Efficient FeedTMB和CHO CD Efficient FeedTMC的混合物；
(5)在培养的第7天加入当天培养体积3％的Acti CHO Feed A和当天培养体积0.3％的Acti CHO Feed B；
(6)在培养的第9天加入当天培养体积2％的Acti CHO Feed A和当天培养体积0.2％的Acti CHO Feed B；
(7)在培养的第11天收获目的蛋白。
9.根据权利要求1所述的培养工艺，其特征在于，在37℃培养的第5天转入33℃进行培养。
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