[发明专利]一种降低酸性变体含量的CHO细胞培养工艺

说明书

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，特别涉及一种重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白基于CHO表达系统的细胞培养工艺。

背景技术

目前，哺乳动物表达系统是实现重组蛋白异源表达最好的系统，最具代表性的是中国仓鼠卵巢细胞(CHO)，其主要有以下优势：能悬浮培养，操作简单，易于放大；具有高效表达能力，且所分泌的蛋白具有正确的翻译后修饰功能；只分泌自身蛋白，有利于产物的纯化。大规模动物细胞悬浮培养作为商业化生产重组蛋白等需要糖基化修饰、结构复杂的蛋白质的重要手段，已成为生物制药的核心技术之一。

抗体在生产或者贮存过程中，由于受到复杂的培养环境的影响，诸如转录修饰或者自发性降解，常常会引起抗体表面电荷不同而产生电荷异质性，比如谷胱甘肽化、脱酰胺作用和唾液酸化作用会产生酸性变体，琥珀酰亚胺、酰胺化和C端赖氨酸修饰会产生碱性变体，这些变体不仅影响抗体的活性，而且影响其有效期。而细胞培养工艺作为抗体生产过程中的重要环节，对最终抗体质量影响十分显著。由于哺乳动物细胞培养对于培养环境的要求非常苛刻，同时对表达抗体的质量要求极其严格，因此如何通过工艺条件优化达到产品的质量要求显得尤为关键。如何能提高抗体表达量同时又能降低酸性变体含量的方法是本领域一直难于解决的问题之一。

发明内容

有鉴于此，本发明目的在于提供一种能降低酸性变体含量的CHO细胞培养工艺，特别涉及一种重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白基于CHO表达系统的细胞培养工艺。

为了实现上述目的，本发明通过对基础培养基和浓缩培养基的选择，以及其添加时间的控制，有效降低了酸性变体蛋白的含量。

具体的，本发明提供了一种重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白基于CHO表达系统的细胞培养工艺，包括如下步骤：

(1)添加基础培养基总体积40％-60％的于基础培养基于培养反应器中，保持培养温度为33-37℃；

(2)在培养的第1天和第2天分别补加基础培养基总体积20％-30％；

(3)在培养的第3天加入当天培养体积7.5％-12.5％的CHO CD Efficient Feed^TM A和CHO CD Efficient Feed^TM B的混合物；

(4)第5天加入当天培养体积10-15％的CHO CD Efficient Feed^TM A、CHO CD Efficient Feed^TM B和CHO CD Efficient Feed^TM C的混合物；

(5)在培养的第7天加入当天培养体积2-4.5％的Acti CHO Feed A和当天培养体积0.2-0.45％的Acti CHO Feed B；

(6)在培养的第9天加入当天培养体积1.5-4％的Acti CHO Feed A和当天培养体积0.15-0.4％的Acti CHO Feed B；

(7)在培养的第11天收获目的蛋白。

优选地，本发明的细胞培养工艺，是基于重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的CHO表达系统。

在一些实施方案中，步骤(1)和步骤(2)中基础培养基可为CD FortiCHO、TFS-RDMP-1、TFS-RDMP-9或Hycell CHO。CD FortiCHO、TFS-RDMP-1、TFS-RDMP-9或Hycell CHO均为商业优化过的基础培养基。

在另一些实施方案中，步骤(1)中基础培养基为CD FortiCHO。

在一些实施方案中，步骤(2)中第1天和第2天分别补加的基础培养基为Hycell CHO。

在一些实施方案中，步骤(3)中CHO CD Efficient Feed^TM A和CHO CD Efficient Feed^TM B的体积比为1:1。

在一些实施方案中，步骤(4)中CHO CD Efficient Feed^TM A、CHO CD Efficient Feed^TM B和CHO CD Efficient Feed^TM C的体积比为1:1:1。

另一些实施方案中，细胞培养工艺如下包括步骤：

(1)添加基础培养基总体积的50％于培养反应器中，保持培养温度为33-37℃；