[发明专利]一种用于提取桑树叶片RNA的提取剂及其应用

权利要求书

1.一种用于提取桑树叶片RNA的提取剂，其特征在于，所述提取剂由Tris-HCl，NaCl，EDTA，SDS和巯基乙醇，溶于RNAse固相清除剂水溶液中而成；其中，Tris-HCl的终浓度为0.05-0.2mol/L，NaCl的终浓度为0.25-1.0mol/L，EDTA的终浓度为0.01-0.04mol/L，SDS的终浓度为1％-4％，巯基乙醇的终浓度为2％-8％；所述RNAse固相清除剂水溶液的质量分数为0.1％-0.2％。

2.根据权利要求1所述的提取剂，其特征在于，所述提取剂的制备方法为：向Tris-HCl、NaCl、EDTA和SDS中加入质量分数为0.1-0.2％的RNAse固相清除剂水溶液，室温下静置，使用前每1mL提取剂加入20-80uL巯基乙醇。

3.一种桑树叶片RNA的提取方法，其特征在于，所述提取方法为将桑树叶片样品利用权利要求1或2所述的提取剂进行RNA的提取。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括下面步骤：

步骤a)处理样品：取新鲜或超低温冷冻的桑树叶片与聚乙烯吡咯烷酮合均匀，在液氮中研磨至粉末状；

步骤b)配制权利要求1或2所述的提取剂；

步骤c)抽提：将步骤a)的粉末样品倒入盛有提取液的离心管中，涡旋混匀，离心取上清，加入等体积水饱和酚：氯仿：异戊醇的混合液，涡旋混匀，离心取上清，再加入等体积氯仿：异戊醇混合液，剧烈震荡，室温混匀，离心；

步骤d)吸取：取步骤c)上层清液加入等体积的6M氯化锂，混匀静置，得粗样品；

步骤e)沉淀：将步骤d)静置后的粗样品离心弃上清，用2M氯化锂漂洗后离心弃上清；

步骤f)重悬：加入预冷的乙醇，重悬，离心弃上清，得到沉淀即为桑树叶片RNA。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法包括下面步骤：

步骤a)处理样品：取新鲜或超低温冷冻的桑树叶片与聚乙烯吡咯烷酮混合均匀，在液氮中研磨至粉末状；

步骤b)配制权利要求1-3任一项所述的提取剂；

步骤c)抽提：将100mg步骤a)的粉末样品倒入盛有1mL提取剂的离心管中，涡旋混匀；12000rpm，4℃，离心10min；取上清，加入等体积水饱和酚：氯仿：异戊醇的混合液，涡旋混匀。15000rpm，4℃，离心15min；取上清，加入等体积氯仿：异戊醇混合液，剧烈震荡，室温混匀20min。15000rpm，4℃，离心10min；

步骤d)吸取。取步骤c)上层加入等体积6M氯化锂，轻轻混匀，-80℃静置5h/-20℃过夜，得粗样品；

步骤e)沉淀：将步骤d)静置后的粗样品离心，15000rpm，4℃，离心30min；弃上清，用400μL 2M氯化锂漂洗，15000rpm，4℃，离心20min，弃上清；

步骤f)重悬：加入预冷的70％乙醇，重悬；15000rpm，5min，4℃离心弃上清，得到沉淀即为桑树叶片RNA。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述步骤a)中，聚乙烯吡咯烷酮的质量用量为叶片干重的4％。

7.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述步骤c)中，氯仿：异戊醇混合液中氯仿与异戊醇的体积混合比例为24:1。