[发明专利]氧化降低的配制剂

说明书

本发明提供包含蛋白质与防止该蛋白质氧化的化合物的组合的配制剂。本发明还提供用于生成此类配制剂的方法和使用此类配制剂的方法。本发明进一步提供筛选防止蛋白质组合物中的蛋白质氧化的化合物的方法和防止配制剂中的蛋白质氧化的方法。

对相关申请的交叉引用

本申请要求2013年03月13日提交的美国临时申请No.61/780,845和2013年11月27日提交的美国临时申请No.61/909,813的权益，在此通过述及完整收录其每一篇。

发明领域

本发明涉及包含蛋白质且进一步包含防止所述蛋白质氧化的化合物的液体配制剂、用于生成和使用该液体配制剂的方法以及筛选防止蛋白质组合物中的蛋白质氧化的化合物的方法。

发明背景

氨基酸残基的氧化性降解是在蛋白质药物中常常观察到的一种现象。一些氨基酸残基对氧化易感，特别是甲硫氨酸(Met)、半胱氨酸(Cys)、组氨酸(His)、色氨酸(Trp)、和酪氨酸(Tyr)(Li et al.,Biotechnology and Bioengineering48:490-500(1995))。当蛋白质在各种加工步骤期间暴露于过氧化氢、光、金属离子或这些的组合时通常观察到氧化(Liet al.,Biotechnology and Bioengineering 48:490-500(1995))。特别地，暴露于光(Wei,et al.,Analytical Chemistry 79(7):2797-2805(2007))、AAPH或Fenton试剂(Jiet al.,J Pharm Sci98(12):4485-500(2009))的蛋白质显示出升高水平的色氨酸残基氧化，而那些暴露于过氧化氢的通常只显示出甲硫氨酸氧化(Ji et al.,J Pharm Sci98(12):4485-500(2009))。光暴露可经由形成反应性氧种类(ROS)(包括单线态氧、过氧化氢和超氧化物)导致蛋白质氧化(Li et al.,Biotechnology and Bioengineering 48:490-500(1995)；Wei,et al.,Analytical Chemistry79(7):2797-2805(2007)；Ji et al.,JPharm Sci 98(12):4485-500(2009)；Frokjaer et al.,Nat Rev Drug Discov 4(4):298-306(2005))，而在Fenton介导的反应中通常经羟根发生蛋白质氧化(Prousek et al.,Pureand Applied Chemistry79(12):2325-2338(2007))及在AAPH介导的反应中通常经烃氧基过氧化物发生蛋白质氧化(Werber et al.,J Pharm Sci 100(8):3307-15(2011))。色氨酸氧化导致众多氧化产物，包括羟基色氨酸、犬尿氨酸(kynurenine)、和N-甲酸基犬尿氨酸，而且具有影响安全性和功效的潜力(Li et al.,Biotechnology and Bioengineering 48:490-500(1995)；Ji et al.,J Pharm Sci 98(12):4485-500(2009)；Frokjaer et al.,NatRev Drug Discov 4(4):298-306(2005))。与生物学功能丧失有关的单克隆抗体重链互补决定区(CDR)中特定色氨酸残基的氧化已有报告(Wei,et al.,Analytical Chemistry 79(7):2797-2805(2007))。最近关于Fab分子报告了由组氨酸配位金属离子介导的Trp氧化(Lam et al.,Pharm Res28(10):2543-55(2011))。该报告还援引Fab配制剂中聚山梨酯20的自氧化，其导致各种过氧化物的生成。自氧化诱导的这些过氧化物生成还可导致药物产品长期贮藏期间蛋白质中的甲硫氨酸氧化，因为蛋白质中的Met残基提示起内部抗氧化剂的作用(Levine et al.,Proceedings of the National Academy of Sciences of theUnited States of America 93(26):15036-15040(1996))且容易被过氧化物氧化。氨基酸残基的氧化具有影响蛋白质生物学活性的潜力。单克隆抗体(单抗)可尤其如此。IgG1单抗中Met254和Met430处的甲硫氨酸氧化在转基因小鼠中潜在影响血清半衰期(Wang et al.,Molecular Immunology48(6-7):860-866(2011))，而且还影响人IgG1对FcRn和Fcγ受体的结合(Bertolotti-Ciarlet et al.,Molecular Immunology 46(8-9)1878-82(2009))。