[发明专利]蛋白质纯化方法

权利要求书

1.一种用于从蛋白质制剂纯化期望蛋白质的方法，其包括：

通过用可溶性有机多价离子、固定化有机多价离子或两者处理，由此来调节所述蛋白质制剂，从而移除至少90％的染色质，然后

(1)在大于0.15M的浓度的非蛋白质沉淀盐的存在下用非离子性有机聚合物沉淀所述期望蛋白质以提供所述期望蛋白质的沉淀物；或

(2)在非蛋白质沉淀盐的浓度小于0.15M的情况下用非离子性有机聚合物沉淀所述期望蛋白质以提供沉淀物，随后在大于0.15M的浓度的非蛋白质沉淀盐的存在下用非离子性有机聚合物洗涤所述沉淀物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述处理是在过饱和尿囊素的存在下进行的。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述沉淀或洗涤步骤在不存在蛋白质沉淀盐的情况下和/或在没有将所述期望蛋白质的pH调节到所述期望蛋白质的等电点的0.5个pH单位以内的值的情况下进行。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法进一步包括在不存在非离子性有机聚合物的情况下用蛋白质沉淀盐洗涤所述沉淀物，其中所述蛋白质沉淀盐以足够保持所述期望蛋白质处于沉淀状态的浓度存在。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述有机多价离子为正电性有机添加剂。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述正电性有机添加剂是选自由以下各项组成的可溶性阳离子群组中的一种或多种：亚甲蓝、依沙吖啶、氯己定、苯扎氯铵和十六浣基三甲基溴化铵。

7.根据权利要求5所述的方法，其中所述正电性有机添加剂是选自由因固定在固体表面上而不可溶的阳离子组成的群组中的一种或多种，所述阳离子包括伯氨基、仲氨基、叔氨基、季氨基、含有超过一个由一种或多种类型的氨基所赋予的正电荷的配阳离子。

8.根据权利要求5所述的方法，其中所述正电性有机添加剂是固定在固体上的三(2-氨乙基)胺。

9.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述有机多价离子为负电性有机添加剂。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述负电性有机添加剂是选自由庚酸、辛酸、辛烯酸、壬酸、壬烯酸、癸酸和甲基蓝组成的可溶性阴离子群组中的一种或多种。

11.根据权利要求9所述的方法，其中所述负电性有机添加剂是选自由因固定在固体表面上而不可溶的阴离子组成的群组中的一种或多种，所述阴离子包括二氧磷基、羧基、磺基、含有超过一个由一种或多种类型的带负电基团所赋予的负电荷的配阴离子。

12.根据权利要求9所述的方法，其中所述负电性有机添加剂是亚氨基二乙酸、氮川乙酸或两者的组合。

13.根据权利要求5所述的方法，其中所述正电性有机添加剂对金属离子具有1:1亲和性。

14.根据权利要求9所述的方法，其中所述负电性有机添加剂对金属离子具有1:1亲和性。

15.根据权利要求2所述的方法，其中尿囊素以过饱和浓度存在，所述过饱和浓度在0.6-50％的范围。

16.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述非离子性有机聚合物是聚乙二醇。

17.根据权利要求1所述的方法，其中聚合物尺寸在1000到12,000道尔顿的范围。

18.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述非蛋白质沉淀盐是氯化钠。