[发明专利]在非离子有机聚合物和正电性表面存在下的蛋白质纯化

权利要求书

1.一种将所需的蛋白质从制品中纯化的方法，其包括：

(a)以在原始产生培养基中存在有少于约5％的染色质的形式提供所述制品；

(b)使所述制品与非离子有机聚合物和盐接触，其中非离子有机聚合物的浓度足以使所述所需蛋白质沉淀或使得它附着在亲水性表面上，或将它维持在沉淀的状态或附着在所述亲水性表面上，所述盐浓度足以产生大于生理电导率；以及

(c)使所述制品与至少一种正电性表面接触，其中所述所需蛋白质基本上不吸附到所述至少一种正电性表面上，同时不阻止酸性污染物吸附到所述至少一种正电性表面上，所述接触任选地在足以产生大于生理电导率的盐浓度存在下进行。

2.如权利要求1所述的方法，其进一步包括(d)使所述制品与至少一种非离子亲水性表面接触。

3.如权利要求1所述的方法，其中在步骤(a)和(b)期间所述盐浓度是相同的。

4.如权利要求1所述的方法，其进一步包括在多孔膜上保留所述沉淀的所需蛋白质，同时可溶性污染物通过穿过所述多孔膜而被消除。

5.如权利要求1所述的方法，其进一步包括在基本上惰性的微孔膜上保留被沉淀的所需蛋白质，同时可溶性污染物通过穿过所述微孔膜而被消除，而与所述盐浓度无关。

6.如权利要求1所述的方法，其进一步包括当电导率大于生理电导率时，在正电性的微孔膜上保留被沉淀的所需蛋白质，同时可溶性污染物穿过所述微孔膜。

7.如权利要求1所述的方法，其中在单个集成设备中执行所述方法。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述非离子有机聚合物是聚乙二醇(PEG)。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述非离子有机聚合物的平均聚合物尺寸在来自由以下各项组成的组的范围：(a)约1,500道尔顿至约15,000道尔顿；(b)约2,000道尔顿至约12,000道尔顿；(c)约3,000道尔顿至约10,000道尔顿；(d)约4,000道尔顿至约8,000道尔顿；以及(e)约5,000道尔顿至约6,000道尔顿。

10.如权利要求1所述的方法，其中电导率比生理电导率大至少1mS/cm。

11.如权利要求1所述的方法，其中所述盐选自由以下各项组成的组：氯化钠、氯化钾、乙酸钠、乙酸钾、硫氰酸钠、硫氰酸钾、盐酸胍、以及其组合。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述盐是氯化钠，所述氯化钠的浓度选自由以下各项组成的组：(a)约0.5M至约1.5M；(b)约2.0M至约3.0M；以及其中间范围。

13.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种正电性表面是具有选自由以下各项组成的组的平均尺寸的孔的膜：(a)约100nm、(b)约220nm、(c)约450nm、(d)约1微米、(e)约2微米、以及其中间值。

14.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种正电性固体是多个颗粒。

15.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种正电性固体是选自包括以下各项的组的色谱装置的一部分：基于整体柱的色谱装置、基于膜的色谱装置、基于颗粒的色谱装置、基于支撑水凝胶的大网状骨架的装置、以及其组合。

16.如权利要求1所述的方法，其中所述盐浓度选自包括以下各项的组：零量、1mM、2mM、5mM、10mM、25mM、50mM、100mM、以及其中间浓度。

17.如权利要求1所述的方法，其中在步骤(a)期间pH值在选自由以下各项组成的组的范围：(a)约8至约9、(b)约8至约8.5、(c)约7.5至约8.5、(d)约7.25至约8.25、(e)约7.0至约8.0、(f)约6至约7、以及其中间pH值范围。

18.如权利要求1所述的方法，其中在步骤(b)期间pH值在选自由以下各项组成的组的范围：(a)约5至约9、(b)约6至约8、(c)约6.5至约7.5、(d)约7.5至约8.5、以及其中间pH值范围。

19.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种亲水性表面包括选自由以下各项组成的组的一种：膜、整体柱、以及多个颗粒，其中所述多个颗粒任选地是磁性的。