[发明专利]抗体的原位亲和力成熟作用

权利要求书

1.一种在可生产单克隆抗体的既有融合瘤细胞中使亲和力成熟及抗体类别转换重组的方法，该方法包含下列步骤：

(a)使用可控制型活化诱导胞苷去胺酶表达系统，在所述既有融合瘤细胞中表达活化诱导胞苷去胺酶但不表达选殖抗体基因；

(b)测定自然出现在所述既有融合瘤细胞表面上的抗体的表达量及抗原结合能力；

(c)通过所述自然出现在所述既有融合瘤细胞表面上的抗体，通过荧光活化细胞分选的方式，从会优先与经荧光标记的抗原结合的融合瘤细胞中选出会分泌高亲和力抗体的融合瘤细胞；以及

(d)重复进行所述方法，直到所分离出的融合瘤会分泌亲和力够高的抗体后，通过对所述细胞转染CRE重组酶或通过移除脱氧羟四环素来终止所述步骤(a)。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体经过类别转换重组，由IgM转换为选自由IgG、IgA及IgE所组成的群组的类别。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述融合瘤细胞为会分泌完全人源性抗体的融合瘤细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述类别转换重组发生在会分泌完全人源性抗体的融合瘤细胞中。

5.根据权利要求2所述的方法，其中所述类别转换重组发生在会分泌完全人源性抗体的融合瘤细胞中。

6.一种生成可生产单克隆抗体的新融合瘤细胞的方法，其中所述融合瘤细胞经受可调式抗体亲和力成熟作用及抗体类别转换重组，该方法包含下列步骤：

(a)使用可控制型活化诱导胞苷去胺酶表达系统，在骨髓瘤融合瘤融合伴侣细胞中表达活化诱导胞苷去胺酶但不表达选殖抗体基因；

(b)在所述表达活化诱导胞苷去胺酶的骨髓瘤细胞与得自经抗原免疫的动物的B细胞之间生成融合瘤细胞；

(c)通过自然出现在所述融合瘤细胞表面上的抗体，通过荧光活化细胞分选的方式，从会优先与经荧光标记的抗原结合的新融合瘤细胞中选出会分泌高亲和力抗体的融合瘤细胞；以及

(d)重复进行所述方法，直到所分离出的融合瘤会分泌亲和力够高的抗体后，通过对所述细胞转染CRE重组酶或通过移除脱氧羟四环素来终止所述步骤(a)。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗体经过类别转换重组，由IgM转换为选自由IgG、IgA及IgE所组成的群组的类别。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述融合瘤细胞会分泌完全人源性抗体。

9.根据权利要求6所述的方法，其中所述类别转换重组发生在会分泌完全人源性抗体的融合瘤细胞中。

10.根据权利要求7所述的方法，其中所述类别转换重组发生在会分泌完全人源性抗体的融合瘤细胞中。