[发明专利]高产率制备生理活性多肽复合物的改进方法

说明书

本发明涉及一种制造生理活性多肽、非肽聚合物连接子及免疫球蛋白恒定区通过共价键连接而成的复合物的方法。更具体地，本发明涉及一种在制造生理活性多肽复合物时，将盐用于偶联反应，以此改善低产率问题而可高效地制造生理活性多肽复合物的方法。根据本发明的制造方法，能够以高纯度与高产率制造生理活性多肽‑非肽聚合物‑免疫球蛋白恒定区复合物，利用其制造的生理活性多肽复合物的制造成本低，因此可有效地利用于可提高产业性且提高患者用药依从性的生理活性多肽的长效制剂的开发中。

技术领域

本发明涉及一种制造生理活性多肽、非肽聚合物连接子及免疫球蛋白恒定区通过共价键连接而成的复合物的方法。更具体地，本发明涉及一种在制造生理活性多肽复合物时，将盐用于偶联反应，以此改善低产率问题而可高效地制造生理活性多肽复合物的方法。

背景技术

通常，生理活性多肽因其稳定性低而易于变性，且被血液中的蛋白水解酶分解而易于通过肾脏或肝脏排除，因此为了保持包含生理活性多肽作为药物成分的蛋白质药物在血液中的浓度与效价，需要频繁地向患者投用蛋白质药物。然而，在以注射剂形态向患者投用的大部分蛋白质药物的情况下，频繁地进行注射以保持生理活性多肽在血液中的浓度，而这会给患者带来非常大的痛苦，且产生高昂的治疗费用。为了解决这种问题，不断进行努力以增加蛋白质药物在血液中的稳定性且长时间较高地保持血液中的药物浓度而将药效极大化。这种蛋白质药物的长效制剂需要在增加蛋白质药物的稳定性的同时，使药物本身的效价保持在足够高的水平，且应避免在患者体内引起免疫反应。

作为稳定蛋白质、抑制与蛋白水解酶的接触及由肾脏造成损失的方法，以往采用了向蛋白质药物表面化学加成像聚乙二醇(polyethylene glycol：以下简称为“PEG”)一样溶解度较高的高分子的方法。已知PEG非特异性地结合到靶蛋白的特定位点或多个位点而增加溶解度，由此在稳定蛋白质且防止蛋白质水解的方面有效，并且也不会导致任何特殊的副作用(Sada等，J.Fermentation Bioengineering 71:137-139,1991)。

然而，使用PEG的方法虽可增加PEG分子量而延长肽药物在生物体内的药效时间，但存在如下问题：分子量越增加则肽药物的效价越明显降低，并且与肽的反应性越降低而产率减少。

另外，制造免疫球蛋白片段与生理活性多肽的融合蛋白的方法虽可克服聚乙二醇化(pegylation)产率低的问题及非特异性，但存在如下问题：血液半衰期的增加效果不如预期明显，在一些情况下效价较低。为了将血液半衰期的增加效果极大化而还使用多种肽连接子，但存在可能引起免疫反应的可能性。另外，在使用像BNP一样具有二硫键(disulfide bond)的肽的情况下，存在如下问题：错误折叠(misfolding)的概率较高而难以应用；及在具有非天然氨基酸残基的情况下，无法以基因重组的形态生产。

胰岛素作为从人的胰腺的β细胞分泌的肽，是一种对调节体内的血糖发挥重要作用的物质。在无法正常地分泌这种胰岛素或所分泌的胰岛素在体内无法正常地发挥作用的情况下，无法调节体内的血糖而导致血糖升高，将这种状态称为糖尿病。将之前所提及的情况称为II型糖尿病，将无法从胰腺分泌胰岛素而导致血糖升高的情况称为I型糖尿病。在II型糖尿病的情况下，利用以化学物质为主要成分的口服降血糖剂进行治疗，对于一部分患者，还利用胰岛素进行治疗。相反地，在I型糖尿病的情况下，必须投用胰岛素。

目前比较常用的胰岛素治疗法是在餐前或餐后注射胰岛素的方法。然而，这种胰岛素治疗法需要持续地每天注射3次胰岛素，因此给患者带来极大的痛苦与不适。为了克服这种问题而进行了各种尝试，其中之一就是提高肽药物对生物膜的透过度而通过口腔或鼻腔吸入肽药物至体内。然而，这种方法与注射剂相比，肽的体内传递效率明显较低，因此按照所要求的条件保持肽药物在体内的活性仍较为困难。