[发明专利]RNA修饰的简易检测方法及用该检测方法的2型糖尿病的检查方法

权利要求书

1.一种检测方法，是非疾病诊断方法，用于检测tRNA中存在的RNA修饰即硫甲基化、甲基化或者牛磺酸化，所述检测方法使用1种正向引物和2种反向引物，将以下2个工序各自分别或者同时进行，用定量PCR法或者实时定量PCR法测定由各工序生成的cDNA量的差，从而检测该RNA修饰，

a.使用第1反向引物，将该RNA用作模板，通过逆转录生成cDNA的工序，其中，该第1反向引物是以与该RNA上的包含具有该RNA修饰的部位的区域互补结合的方式设计的寡核苷酸，

b.使用第2反向引物，将该RNA用作模板，通过逆转录生成cDNA的工序，其中，该第2反向引物是以与该RNA上的具有该RNA修饰的部位的3’侧的区域互补结合的方式设计的寡核苷酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，将所述工序a和b分别进行。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述cDNA量的差是以核酸扩增反应中的核酸的扩增速度的差来进行测定的。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述RNA中存在的RNA修饰是tRNA中存在的硫甲基化。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述tRNA中存在的硫甲基化是与Lys对应的tRNA、与Trp对应的tRNA、与Phe对应的tRNA或者与Ser(UCN)对应的tRNA中的任一种的第37位的腺苷的硫甲基化。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述tRNA中存在的硫甲基化是与Lys对应的tRNA的第37位的腺苷的硫甲基化。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述RNA含有来自人组织或者人血液的RNA。

8.根据权利要求5所述的方法，其中，所述RNA含有来自人外周血的RNA。

9.根据权利要求6所述的方法，其中，所述RNA含有来自人外周血的RNA。

10.根据权利要求7所述的方法，其中，所述RNA含有来自人外周血的RNA。

11.一种非疾病诊断方法的检测方法，对于tRNA中存在的RNA修饰率已知的至少2个试样和RNA修饰率未知的试样分别进行权利要求1或2所述的方法，将显示出对于各试样测定的cDNA量的差的参数进行比较，从而测定未知试样中的RNA修饰率。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述参数是使用第1反向引物和第2反向引物时的用于靶核酸扩增的阈值循环数(threshold cycle)的差。

13.一种非疾病诊断方法的检测方法，对于tRNA中存在的RNA修饰率未知的试样进行权利要求1或2所述的方法，将显示出对于该试样测定的cDNA量的差的参数与预先确定的标准曲线进行比较，从而测定未知试样中的RNA修饰率。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述参数是使用第1反向引物和第2反向引物时的用于靶核酸扩增的阈值循环数(threshold cycle)的差。

15.一种试剂盒，其特征在于，用于检测试样中的tRNA中存在的RNA修饰即硫甲基化、甲基化或者牛磺酸化，含有1种正向引物和2种反向引物，所述2种反向引物为第1反向引物和第2反向引物，

其中，所述第1反向引物是以与该RNA上的含有具有该RNA修饰的部位的区域互补结合的方式设计的寡核苷酸，

所述第2引物是以与该RNA上的具有该RNA修饰的部位的3’侧的区域互补结合的方式设计的寡核苷酸，

通过定量PCR法或实时定量PCR法，测定使用所述第1反向引物扩增而得的DNA量与使用所述第2反向引物扩增而得的DNA量的差，从而检测该RNA修饰。