[发明专利]通过直接MALDI/MS检测干液斑中化合物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及存在于生物体液中至少一种化合物的检测方法，尤其涉及存在于干液斑中至少一种化合物的检测和/或鉴定方法。本发明还涉及一种用于分析干液斑中化合物空间分布的方法。本申请描述了用于干液斑分析的新方法。

背景技术

液体分析目前主要在液态样本上进行。这样的液态样本不便于运输，而且分子化合物的完整性不能长期保持。为了便于运输和更长时间的保存，液体可以在合适的载体上进行干燥。例如，干血纸片法(或DBS)是最小血液取样技术，其包括滴加至少一个小血滴到纸载体上。通常，该纸载体被特别设计为能够吸收小血滴以用于进一步分析。在送入分析实验室之前，血斑允许在室温下风干几个小时。少量的血液样本和试样的易于处理造就了DBS取样技术的成功。此外，它允许简化存储和廉价运输。它的成功始于20世纪60年代，那时罗伯特·盖斯瑞(Robert Guthrie)博士开发出来了用于苯丙酮尿症检测的化验。从那以后，“Guthrie卡”已在新生婴儿筛查中被全世界采用。利用纤维素载体血液取样(用少量血液的微创技术)的优点是特别适合于儿科患者，但对于临床前及临床研究(3R原则：减少，替代和优化)同样有吸引力。目前，干斑取样技术的使用被推广到其他生物体液，如血清，血浆或尿液。

例如，新生儿筛查和药理活性都采用质谱(或MS)技术用于干血斑分析。直到最近，在液体介质中萃取和分离的几个步骤仍然是必要的；导致在MS分析可进行之前有一个较长时间的样本制备。取自干血斑样本的少许(分析物)的液体萃取通常使用水溶剂或有机溶剂的混合物进行，接着是液相色谱(LC)分离。由于液体萃取的步骤和/或分离的步骤存在，样本被污染和/或存在于样本中的化合物被破坏可能在这些步骤当中的一个步骤中发生。为了规避这些样本制备和操作的问题，而这在诊断和制药领域中极为重要，新的、直接的技术发展起来了(综述见Déglon et al.,2012[Anal Bioanal Chem 2012,402:2485-2498])。技术的发展主要集中在通过直接洗脱(例如在线液体萃取)或直接解吸/电离进行DBS快速分析。后一方法是最快的解决方案(无需预处理)，特别适合于高通量的干液斑分析。在这样的背景下，提出了一些从不同的基本电离技术发展而来的敞开式MS方法：解吸电喷雾电离(DESI)和电喷雾电离(ESI)中的纸喷雾电离(PSI)，气体放电电离(GDI)中的实时直接分析(DART)和电子电离(EI)中的常压热解吸化学电离(APTDCI)。

这些MS方法用来分析不同的干液斑，但出现了主要的限制。例如，干血斑中的分析物分布可能受到几种因素的影响，如血斑大小、红细胞压积水平和扩散性质(色层效应)。通过直接解吸/电离的分析物化验，可能会被这些因素所影响。分析物分布成像是指导这些分析物化验的有效方法。然而，干血斑中的分析物分布成像(在上述MS方法中)已经完成。放射自显影的灵敏度和分辨率都还不足以进行可靠的分析。因此，由于成像方法的低灵敏度和/或低分辨率，分析干液斑样本的直接解吸/电离方法会受到限制，从而导致分析物检测不够精确。样品制备和随后的分析仍然是基本问题，其限制了这些方法在干液斑分析领域的应用。

因此，需要一种简单、快速且可靠但无需预处理的方法来检测存在于干液斑中的化合物。此外，还需要一种不使用特定标签，允许存在于干液斑中化合物成像，同时具有高灵敏度和高质量分辨率，而对生物污染物不太敏感的MS方法。

发明内容

因此在这个背景下，本发明的目的是通过提供一种检测存在于液体样本中至少一种化合物的方法，至少部分地解决目前现有技术中存在的问题，优选地，该方法没有液体萃取步骤，最终通过印迹步骤，其可以保持存在于干液斑中化合物的空间分布，并允许通过分子成像工具进一步测定它们的空间分布。

根据本发明的一个方面，提供了一种检测存在于生物体液中至少一种化合物的方法，所述方法包括以下步骤：

步骤a，在载体上提供至少一个干液斑；

步骤b，固定在所述载体上的所述干液斑的至少一部分到导电表面上；

步骤c，提供紫外光吸收化合物的水溶液或有机溶液；

步骤d，将所述紫外光吸收化合物沉积到固定在所述导电表面上的所述载体上干液斑的至少一部分上；

步骤e，使载体上所述干液斑的至少一个区域经受基质辅助激光解吸/电离过程以产生离子；

步骤f，用质谱仪分析仪获取所述离子的全扫描模式质谱，和

步骤g，通过分析所述全扫描模式质谱确定至少一种化合物的存在。