[发明专利]用于通过发酵生产氨基酸的微生物和方法

权利要求书

1.一种使用微生物通过发酵用于生产有机化合物的方法，其特征在于进行下述步骤：

a.发酵产生有机化合物的微生物，其中编码多肽的多核苷酸在所述微生物中是过表达的，所述多肽的氨基酸序列与SEQIDNO:2的氨基酸序列至少80％相同；并且其中发酵在发酵培养基中进行，形成发酵液，

b.富集来自a)的发酵液中的所述有机化合物。

2.根据权利要求1的用于生产有机化合物的方法，其特征在于编码多肽的多核苷酸在所述微生物中是过表达的，所述多肽的氨基酸序列与SEQIDNO:2的氨基酸序列至少95％相同。

3.根据权利要求1或2的用于生产有机化合物的方法，其特征在于所述编码的多肽具有转氢酶的活性。

4.根据权利要求1-3中任一项的用于生产有机化合物的方法，其特征在于所述编码的多肽包含SEQIDNO:2的氨基酸序列。

5.根据权利要求1的用于生产有机化合物的方法，其特征在于相对于其中编码氨基酸序列与SEQIDNO:2的氨基酸序列至少80％相同的多肽的多核苷酸未过表达的微生物的发酵，所述有机化合物的生产增加至少0.5％。

6.根据权利要求1-5中任一项的用于生产有机化合物的方法，其特征在于通过选自下述的一种或多种措施实现所述过表达：

a)所述基因的表达处于启动子的控制下，所述启动子在用于所述方法的微生物中强于所述基因的天然启动子；

b)增加编码具有转氢酶活性的多肽的所述基因的拷贝数；优选通过将所述基因插入具有增加的拷贝数的质粒中，和/或通过将所述基因以至少一个拷贝整合到所述微生物的染色体内；

c)使用核糖体结合位点进行所述基因的表达，所述核糖体结合位点在用于所述方法的微生物中强于所述基因的原始核糖体结合位点；

d)通过优化用于所述方法的所述微生物的密码子使用进行所述基因的表达；

e)通过减少由所述基因转录的mRNA中的mRNA二级结构进行所述基因的表达；

f)通过消除由所述基因转录的mRNA中的RNA聚合酶终止子进行所述基因的表达；

g)使用由所述基因转录的mRNA中的mRNA稳定序列进行所述基因的表达。

7.根据权利要求1-6中任一项的用于生产有机化合物的方法，其特征在于所述有机化合物是L-氨基酸，其选自L-苏氨酸、L-异亮氨酸、L-赖氨酸、L-甲硫氨酸、L-鸟氨酸、L-脯氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸和L-色氨酸。

8.根据权利要求1-7中任一项的用于生产有机化合物的方法，其特征在于它是棒状杆菌属(Corynebacterium)或埃希氏杆菌属(Escherichia)的有机化合物分泌微生物。

9.根据权利要求1-8中任一项的用于生产有机化合物的方法，其特征在于它是谷氨酸棒状杆菌(Corynebacteriumglutamicum)或大肠杆菌的有机化合物分泌微生物。

10.根据权利要求1-6中任一项的用于生产有机化合物的方法，特征在于其选自下述的方法：分批方法、补料分批方法、重复补料分批方法和连续方法。

11.根据权利要求7的方法，其特征在于所述有机化合物或者含有机化合物的液体或固体产物得自所述含有机化合物的发酵液。

12.生产有机化合物的微生物，其中编码多肽的多核苷酸是过表达的，所述多肽的氨基酸序列与SEQIDNO:2的氨基酸序列≥80％相同。

13.根据权利要求12的微生物，其特征在于所编码的多肽的氨基酸序列与SEQIDNO:2的氨基酸序列≥95％相同。

14.根据权利要求12的微生物，其特征在于所编码的多肽包含SEQIDNO:2的氨基酸序列。

15.根据权利要求12-14中任一项的微生物，其选自棒状杆菌属和肠杆菌科(Enterobacteriaceae)的细菌，其中谷氨酸棒状杆菌是优选的。

16.根据权利要求12-15中任一项的微生物，其特征在于所述过表达的多核苷酸具有转氢酶的活性。