[发明专利]用于增加蛋白质的焦谷氨酸形成的方法在审
| 申请号： | 201480019372.7 | 申请日： | 2014-04-03 |
| 公开（公告）号： | CN105121469A | 公开（公告）日： | 2015-12-02 |
| 发明（设计）人： | M·R·范斯让维迪克;S·沃;B·索恩 | 申请（专利权）人： | 麦布西恩斯公司 |
| 主分类号： | C07K16/28 | 分类号： | C07K16/28 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 赵蓉民;陆惠中 |
| 地址： | 乌拉圭蒙*** | 国省代码： | 乌拉圭;UY |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 增加 蛋白质 谷氨酸 形成 方法 | ||
1.一种用于纯化含有N-端谷酰胺和/或N-端谷氨酸的蛋白质的方法，所述方法包含在促进所述蛋白质的N-端谷酰胺和/或N-端谷氨酸环化成N-端焦谷氨酸的条件下温育所述蛋白质的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白质是抗体。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述蛋白质是抗-CD20抗体。
4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中所述抗-CD20抗体包含与SEQIDNO:1相同的轻链序列和与SEQIDNO:2相同的重链序列。
5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其中所述转化在20℃-45℃的温度下进行。
6.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的方法，其中所述转化在细胞培养基中或在缓冲液中进行。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述缓冲液的浓度选自20mM到150mM的范围。
8.根据权利要求1至7中任一权利要求所述的方法，其中pH值在3.5-9.0范围内。
9.根据权利要求1至8中任一权利要求所述的方法，其中N-端谷酰胺和/或谷氨酸到焦谷氨酸的转化率达到至少50％。
10.根据权利要求1至9中任一权利要求所述的方法，其中所述转化步骤包含所述N-端谷酰胺和/或所述谷氨酸以非酶促方式转化成焦谷氨酸。
11.根据权利要求1至10中任一权利要求所述的方法，其中在转化之前，所述蛋白质具有1到4个N-端谷酰胺残基和/或1到4个N-端谷氨酸残基。
12.根据权利要求1至11中任一权利要求所述的方法，其进一步包含用适合的树脂进行蛋白质A色谱和用适合的树脂进行离子交换色谱的步骤。
13.根据权利要求1至12中任一权利要求所述的方法，其中所述方法包含以下步骤：
(a)用适合的树脂进行蛋白质A捕获，
(b)在3.0-4.0范围内的pH值下进行病毒灭活，
(c)阴离子交换色谱，
(d)所述蛋白质的N-端谷酰胺和/或谷氨酸转化成焦谷氨酸，
(e)用适合的树脂和梯度洗脱物进行阳离子交换色谱以分离产物同种型，
(f)病毒过滤，和
(g)超滤/透滤(UF/DF)。
14.根据权利要求13所述的方法，其包含在步骤(d)之后进行12到72小时的被动冷却的步骤。
15.一种制备作为药学产物的活性药学成分的具有N-端焦谷氨酸的蛋白质的方法，所述方法包含根据权利要求1至14中任一权利要求所述的纯化方法。
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