[发明专利]包含富集主要电荷同工型的抗体组合物的药物

说明书

发明领域

本发明属于涉及借助ADCC摧毁靶细胞的机制的抗体疗法技术领域。它涉及作为药物使用的纯化抗体组合物，所述的纯化抗体组合物通过以下获得：借助层析对抗体组合物中天然存在的不同电荷同工型分离并且合并与层析图主峰相对应的一个或多个层析级分，因而获得富含所述主峰的单克隆抗体组合物，后者占获得的组合物的层析图的至少85％。

现有技术

在过去十年期间，已经在以下各种治疗领域借助抗体、经常借助单克隆抗体大力开发被动免疫疗法治疗：癌症、Rhesus阴性怀孕女性中预防同种异体免疫、感染性疾病、炎性疾病以及尤其自身免疫疾病。

尽管借助抗体的被动免疫疗法治疗如今已经显示其治疗益处，但是观察到的临床反应水平仍然不足，并且因此需要有可能增加临床反应并施用更小剂量的更高效抗体组合物，以便限制副作用。

如同任何生物产品，抗体组合物本质上是不均一的。实际上，治疗中所用的抗体组合物在生物系统(细胞、转基因动物或植物)中产生，其中蛋白质通常并且因此尤其抗体经受众多翻译后修饰(酶促修饰或降解)，这将在一种抗体分子与另一种抗体分子见不同并因而在产生的抗体组合物内部生成微小异质性。

抗体是由四条多肽链组成的糖蛋白：以可变数目二硫键和非共价相互作用结合的两条总体上相同的重链(所谓“H”链即“重”链)和两个总体上相同的轻链(所谓“L”链即“轻”链)。这些链形成Y型结构，重链构成Y型结构的茎部并构成Y型结构的每条臂的一半，轻链构成Y型结构的每条臂的 一半。每条轻链由一个恒定结构域(C_L)和一个可变结构域(V_L)组成；重链由一个可变片段(V_H)和3个或4个恒定片段(C_H1至C_H3或C_H4)组成，这取决于抗体同种型(IgG包含3个恒定片段C_H1至C_H3)。轻链(V_L+C_L)和重链V_H结构域和C_H1结构域的结合形成Fab片段，结合的结构域VL和VH负责识别抗原。两条重链的恒定结构域(C_H2和C_H3)或(C_H2至C_H4)形成恒定Fc片段。

已知抗体经历以下翻译后修饰：重链或轻链末端修饰，Fc部分(和任选地Fab)糖基化、脱酰胺化、异构化、氧化、片段化和聚集(参见Vlasak等人,–2008)。

大多数翻译后修饰导致抗体的表面电荷特性改变，或通过修饰带电荷基团的数目直接改变，或通过引入结构性修饰间接地改变，所述的结构性修饰本身调整带电荷残基的局部分布或改变它们的pKa。因此，全部这些修饰也均生成微小异质性，许多同工型具有同一种抗体的不同电荷，具有不同的等电点(pI)，因此共存于抗体组合物内部(参见Vlasak等人,–2008)。

在翻译后修饰当中，抗体恒定部分Fc的糖基化如今因强烈影响抗体的许多生物学特性而知名：体内半寿期(参见Wright等人,–1994)，诱导ADCC反应(抗体依赖性细胞毒性细胞反应)的能力(参见Satoh等人,–2006，Presta等人,–2006)、CDC反应(补体依赖性细胞毒反应，参见Wright等人,–1994，Presta等人,–2006)等。特别地，岩藻糖化聚糖形式的抗体组合物的含量如今已知非常强烈地影响组合物在体内诱导ADCC反应的能力。

相反，虽然许多文章旨在表征抗体组合物中存在的电荷同工型以判定商业批次单克隆抗体的再现性和质量，但是直到现在仍认为导致同一种抗体的许多不同电荷同工型在抗体组合物内部存在的其他翻译后修饰对抗体的体内生物学特性影响甚微或无影响。因此，虽然现有技术中通常认为就电荷同工型方面追踪商业批次抗体的质量是必不可少的，但是将这种追踪视为纯粹追踪产品质量并且从未存在建议为治疗目的，使用抗体组合物的极度富含特定电荷同工型的纯化级分。实际上，在没有显示明显影响抗 体组合物的至少某些生物学特性的情况下，没有理由不使用整个组合物，没有理由使得制备方法复杂化和降低产率。现在，如上文所示，除了糖基化以外，直至现在仍认为导致抗体的许多不同电荷同工型在抗体组合物内存在的其他翻译后修饰不改变抗体的生物学特性。