[发明专利]改进的测定方法

说明书

本发明针对用于改进结合测定法中的测定特异性和性能的方法。

对相关申请的交叉引用

对分别于2013年3月13日提交的美国临时申请系列号61/779,050和2013年12月23日提交的61/919,887进行引用，其各自公开通过引用以其整体并入本文。

发明领域

本发明涉及用于进行免疫分析的改进的方法。所述方法经设计以在免疫分析中放大信号并锚定其中采用的免疫分析复合物。

发明背景

已经开发了大量关于采用结合反应的技术的文献，例如抗原抗体反应，核酸杂交和受体配体反应，用于对样品中感兴趣的分析物的灵敏测量。许多生物化学结合系统的高度特异性导致了在各种市场中许多有价值的分析方法和系统，包括基础研究，人用和兽用诊断，环境监控以及工业测试。可以通过直接测量在结合反应中分析物的参与来测量感兴趣的分析物的存在。在一些方法中，可以通过测量附接到一种或多种结合材料的可观察标记物来指示该参与。

虽然夹心法免疫分析(sandwich immunoassay)形式在许多应用中提供了极好的灵敏度和特异性，一些分析物以过低的浓度存在无法通过传统的免疫分析技术检测。夹心法免疫分析的进行也可能因为检测抗体的非特异性结合以及包含高解离率抗体的夹心法混合物的不稳定性而被限制。然而，修改传统方法来改进灵敏度和特异性的努力通常导致更加复杂，劳动密集的方案，其可能由每一步的低效率而被阻碍，可能极大的影响分析的灵敏度和特异性。例如，在要求多个结合事件和/或反映的复杂分析中，如果任意一个事件或反应不太理想，整体分析的灵敏度和特异性可能变差。对于通过改进灵敏度，减少非特异性结合和改进夹心法复合物的稳定性改进夹心法免疫分析表现的新技术有需要。

发明简述

本发明考虑以下的具体实施方案。不脱离本发明的精神和范围，由本领域的技术人员可以对本文所述的实施方案进行多种修改，增加和改变。这些修改，增加和改变意在落入权利要求的范围内。

实施方案(1)一种在样品中检测感兴趣的分析物的方法，包含：使所述分析物结合到：(i)表面上的捕捉试剂，所述表面包含所述用于所述分析物的捕捉试剂，以及锚定试剂；和(ii)用于所述分析物的检测试剂，其与核酸探针相连；从而在所述表面上形成包含所述捕捉试剂，分析物和检测试剂的复合物；延伸所述探针以形成延伸的序列，其包含结合到锚定试剂的锚定区；将所述延伸的序列结合到所述锚定试剂；以及测量结合到所述表面的延伸序列的量。

在实施方案(1)中，所述捕捉试剂可以是抗体，抗原，配体，受体，寡核苷酸，半抗原，表位，模拟位(mimitope)，或适体(aptamer)。在具体的实施方案中，所述捕捉试剂是抗体。所述检测试剂可以是抗体，抗原，配体，受体，寡核苷酸，半抗原，表位，模拟位，或适体。在具体的实施方案中，所述检测试剂是抗体。在实施方案(1)的一个具体实施例中，所述捕捉和检测试剂是针对分析物的抗体。所述锚定试剂可以包括寡核苷酸序列，适体，适体配体，抗体，抗原，配体，受体，半抗原，表位，或模拟位；以及可选的，所述锚定区可以包括适体而所述锚定试剂可以包括适体配体。所述锚定区可以包含核酸序列而所述锚定试剂可以包括DNA结合蛋白。所述锚定试剂可以包括寡核苷酸序列而所述锚定试剂可以包括互补的寡核苷酸序列。所述锚定区可以包括单链寡核苷酸序列或双链寡核苷酸序列。