[发明专利]用于HLA的修饰的方法和组合物

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2013年3月12日提交的美国临时申请第61/777,627号的权益，其内容据此通过引用整体并入。

对在联邦资助的研究下进行的本发明的权利的声明

不适用。

技术领域

本公开属于基因表达、基因组工程和基因疗法的领域。

背景

MHC抗原最先被表征为在移植反应中起主要作用的蛋白。排斥通过T细胞对植入组织表面上的组织相容性抗原的反应的介导，并且这些抗原的最大的组是主要组织相容性抗原(MHC)。这些蛋白在所有高等脊椎动物的表面上上表达，并且在小鼠中称为H-2抗原(对于组织相容性-2抗原而言)和在人细胞中称为HLA抗原(对于人白细胞抗原而言)。

MHC蛋白在T细胞刺激中起着至关重要的作用。抗原呈递细胞(通常树突细胞)在细胞表面上展示在MHC上的作为外来蛋白质的降解产物的肽。在共刺激信号存在的情况下，T细胞被激活，并将作用于也展示相同肽/MHC复合物的靶细胞。例如被刺激的T辅助细胞将靶向展示与其MHC结合的抗原的巨噬细胞，或细胞毒性T细胞(CTL)将作用于展示外灭病毒肽的病毒感染的细胞。

MHC蛋白具有两种类型I类和II类。I类MHC蛋白是两种蛋白(为由MHC1I类基因编码的跨膜蛋白的α链和为由不存在于MHC基因簇内的基因编码的小的细胞外蛋白的β2微球蛋白链)的异二聚体。所述α链折叠成3个球状结构域，并且当β2微球蛋白链被结合时，球状蛋白结构复合物与抗体复合物相似。外来肽被呈现在也是最可变的两个最N末端结构域上。II类MHC蛋白也是异二聚体，但该异二聚体包含由MHC复合物内的基因编码的两个跨膜蛋白。I类MHC:抗原复合物与细胞毒性T细胞相互作用，而II类MHC将抗原呈递至辅助T细胞。另外，I类MHC蛋白倾向于在几乎所有有核细胞和血小板(以及在小鼠中红细胞)中表达，而II类MHC蛋白被更加选择性地表达。通常地，II类MHC蛋白在B细胞、某些巨噬细胞和单核细胞、郎格尔汉斯细胞和树突细胞上表达。

人中的I类HLA基因簇包含3个大基因座B、C和A以及几个小基因座。II类HLA簇也包含3个大基因座DP、DQ和DR，并且I类和II类基因簇是多态性的，因为在群体中存在I类和II类基因的几个不同等位基因。还存在也在HLA功能中起作用的几种辅助蛋白。Tap1和Tap2亚单位是在将肽抗原加载至I类HLA复合物所必需的TAP转运蛋白复合物的部分，并且LMP2和LMP7蛋白体亚单位在将抗原蛋白水解成肽以在HLA上展示中起作用。已显示LMP7的减少使细胞表面上的MHCI类的量减少，可能通过稳定化的不存在来实现(见Fehling等(1999)Science265:1234-1237)。除了TAP和LMP以外，还存在甲巯蛋白基因，其表达产物形成TAP复合物与HLAI类链之间的桥并且增加肽加载。甲巯蛋白的减少导致具有受损的MHCI类装配的细胞，减少MHCI类的细胞表面表达和削弱免疫反应(见Grandea等(2000)Immunity13:213-222和Garbi等(2000)NatImmunol1:234-238)。

I类表达的调控通常是在转录水平上的，并且几种刺激物诸如病毒感染等可引起转录的变化。I类基因在一些特定组织中被下调，并且该下调的来源似乎在启动子和3’基因间序列内(见Cohen等(2009)PLosONE4(8):e6748)。还有证据表明微RNA能够调控一些I类MHC基因(见Zhu等，(2010)Am.J.ObstetGynecol202(6):592)。

II类MHC表达的调控取决于MHCII增强体复合物的活性。增强体组分(得到最高度研究的增强体复合物的组分之一是RFX5基因产物(见Villard等(2000)MCB20(10):3364-3376))几乎被普遍地表达，并且这些组分的表达似乎不控制MHCII类基因的组织特异性表达或它们的IFN-γ诱导的上调。相反地，作为非DNA结合蛋白的称为CIITA的蛋白(II类反式激活因子)似乎用作MCHII表达的主控制因子。与其它增强体成员相反，CIITA确实展示组织特异性表达，被IFN-γ上调，并且已显示其被几种细菌和病毒抑制，所述细菌和病毒可引起MHCII类表达的下调(被认为是试图逃避免疫监督的细菌的部分(见LeibundGut-Landmann等(2004)Eur.J.Immunol34:1513-1525))。