[发明专利]微囊泡及其制造方法

说明书

本发明提供了用于制造微囊泡的方法，所述微囊泡包含：转基因产物和/或包含转基因的慢病毒RNA，所述方法包括以下步骤：培养已在体外使用慢病毒载体导入转基因的细胞以胞外释放包含所述转基因产物和/或所述包含转基因的慢病毒RNA的微囊泡，其中所述慢病毒载体是至少一种结构蛋白基因缺陷的并且在慢病毒基因组序列中包含处于端粒酶逆转录酶(TERT)基因启动子控制下的转基因；以及收集所释放的微囊泡；和根据此方法获取的微囊泡及其用途。

技术领域

本发明涉及微囊泡及其制造方法。

背景领域

已知多种细胞在体内分泌或释放微囊泡(小型膜囊泡)，例如，外来体。人们已经认为微囊泡的作用之一是在细胞外释放不必要的细胞内组分。然而近年来，示出了微囊泡作为信号传递载体在分泌细胞和其靶细胞之间传递诸如蛋白质或脂类的物质并且在细胞间相互作用中起作用的可能性。

至今已经提出了微囊泡尤其是外来体的多种临床应用。例如，专利文献1公开了从包含疟原虫属(Plasmodium sp.)抗原的网状细胞中分离的外来体在防御疟疾中的用途。专利文献2公开了使用来自B细胞的外来体治疗癌症。专利文献3公开了干细胞衍生的微囊泡在内皮再生或上皮再生中的用途。

慢病毒，例如，人类免疫缺陷病毒(HIV)感染细胞并且具有被整合到分裂细胞和非分裂细胞两者的基因组内的性质。因此，基于慢病毒基因组序列的慢病毒载体作为基因转导工具被广泛应用。

引用列表

专利文献

专利文献1：国际公布WO2011/080271

专利文献2：国际公布WO2011/000551

专利文献3：国际公布WO2009/057165

发明概述

技术问题

本发明的目的是提供微囊泡及其制造方法。

问题的解决方案

本发明人已经进行了勤勉的研究以达到目的并且因此发现，使用包含处在端粒酶逆转录酶(TERT)基因启动子控制下的转基因的慢病毒载体将转基因导入细胞可以激活转基因到宿主基因组的整合和其表达并且可以提高由细胞产生的具有转基因产物的微囊泡等等的细胞外释放。基于这些发现，本发明已经完成。

具体地，本发明涵盖以下方面：

[1]用于制造微囊泡的方法，所述微囊泡包含：转基因产物和/或包含转基因的慢病毒RNA，所述方法包括以下步骤：

培养已在体外使用慢病毒载体导入转基因的细胞以胞外释放包含所述转基因产物和/或所述包含转基因的慢病毒RNA的所述微囊泡，其中所述慢病毒载体是至少一种结构蛋白基因缺陷的并且在慢病毒基因组序列中包含处于端粒酶逆转录酶(TERT)基因启动子控制下的转基因；以及

收集所释放的微囊泡。

[2]根据[1]所述的方法，其中所述细胞不具有所述至少一种结构蛋白基因。

[3]根据[1]或[2]所述的方法，其中所述慢病毒载体是env基因缺陷的。

[4]根据[1]至[3]的任一项所述的方法，其中所述端粒酶逆转录酶(TERT)基因启动子是人类TERT基因启动子。

[5]根据[4]所述的方法，其中所述人类TERT基因启动子包含SEQ ID NO:1的核苷酸序列或与SEQ ID NO:1的核苷酸序列具有90％或更高的序列同一性的核苷酸序列。

[6]根据[5]所述的方法，其中所述人类TERT基因启动子包含与SEQ ID NO:1的核苷酸序列具有95％或更高的序列同一性的核苷酸序列。