[发明专利]艰难梭菌素及其使用方法

权利要求书

1.一种编码R型高分子量(hmw)细菌素的分离的核酸分子，其中 所述核酸分子来自第一艰难梭菌菌株的基因组并且包含：

与编码SEQIDNO:66-77的第二多核苷酸至少80％同一的第一 多核苷酸序列，其中所述核酸分子还包含编码来自第二艰难梭菌菌株 的基因组的原噬菌体或原噬菌体残留物的受体结合域(RBD)或感染 艰难梭菌的噬菌体的RBD的异源序列，并且

其中所述R型hmw细菌素包含与SEQIDNO:78的多肽至少 80％同一的第一基板附着区(BPAR)多肽的氨基末端部分的至少50个 连续氨基酸，并且

其中所述R型hmw细菌素具有针对至少一个艰难梭菌菌株的杀 菌活性；以及

编码与所述RBD同源的第二BPAR的至少所述C末端部分的第 三多核苷酸。

2.如权利要求1所述的核酸分子，其中所述RBD与选自由以下 组成的组的RBD至少80％同一：SEQIDNO:92、94、96、98、100、 102、104、106、108、110、112以及116。

3.如权利要求1所述的核酸分子，其中所述第三多核苷酸编码 所述RBD的全长同源BPAR。

4.如权利要求1所述的核酸分子，其中编码所述RBD的所述同 源BPAR的所述第三多核苷酸插入所述核酸分子中以便使所述RBD 的同源BPAR的C末端部分融合至所述第一BPAR的氨基末端部分。

5.如权利要求1所述的核酸分子，其中编码所述RBD的同源 BPAR的C末端部分的所述第三多核苷酸包含编码与选自由以下组成 的组的序列至少80％同一的BPAR的序列：SEQIDNO:88、91、93、 95、97、99、101、103、105、107、109、111以及115。

6.如权利要求1所述的核酸分子，还包含编码所述RBD的同源 分子伴侣的第四多核苷酸。

7.如权利要求6所述的核酸分子，其中所述同源分子伴侣选自 由以下组成的组：SEQIDNO:89、90、113、114以及117。

8.一种表达盒，其包含如权利要求1所述的核酸分子。

9.如权利要求8所述的表达盒，其中所述R型高分子量(hmw) 细菌素的表达是诱导型的或阻抑型的。

10.如权利要求9所述的表达盒，其中所述表达由小分子诱导物 或去阻抑物来诱导。

11.如权利要求10所述的表达盒，其中所述小分子诱导物或去 阻抑物是活性氧物质(ROS)或ROS的生成物。

12.如权利要求11所述的表达盒，其中所述ROS是对人或其它 动物无毒的过氧化物。

13.如权利要求12所述的表达盒，其中所述过氧化物是过氧化 氢。

14.一种由权利要求1编码的R型hmw细菌素。

15.如权利要求14所述的R型hmw细菌素，其中所述细菌素可 向动物经口施用并且以仍展现杀菌活性的形式排泄到粪便中。

16.如权利要求14所述的R型hmw细菌素，其中所述细菌素在 25℃下在2.5与10之间的pH下孵育30分钟之后保留一些杀菌活性。

17.如权利要求14所述的R型hmw细菌素，其中所述细菌素在 45℃下孵育30分钟之后保留一些杀菌活性。

18.一种产生R型hmw细菌素的方法，所述方法包括将包含与 诱导型启动子可操作地连接的根据权利要求1所述的核酸分子的生 产细胞暴露于在有效诱导所述R型hmw细菌素表达的浓度下的诱导 剂，由此产生所述R型hmw细菌素。

19.如权利要求18所述的方法，其中编码所述R型hmw细菌素 的所述核酸分子与所述生产细胞的基因组是异源的，并且其中所述核 酸分子包含在所述生产细胞的染色体内或包含在所述生产细胞内的 染色体外表达载体中。