[发明专利]利用通用报告物的数字测定

权利要求书

1.一种执行多重数字测定的非诊断方法，所述方法包括：

形成分区，每个所述分区包括相同混合物的一部分，所述混合物包含第一靶和第二靶并且还包含对扩增所述第一靶和所述第二靶的任一靶灵敏的通用报告物，其中，只有一个子集的分区各自包含所述第一靶的至少一个拷贝，并且只有一个不同子集的分区各自包含所述第二靶的至少一个拷贝，且其中所述通用报告物包括嵌入染料；

扩增所述分区中的所述第一靶和所述第二靶至扩增终点；

通过检测来自用于多个分区的通用报告物的光致发光来收集扩增数据，其中，在到达扩增终点之后在同一温度收集所有的扩增数据,并且其中对分区中所述第一靶的扩增产生能够与所述第二靶的扩增区分的光致发光强度；和

确定每个靶的水平，

其中，在所述扩增步骤期间，用于所述第二靶的引物比用于所述第一靶的引物更高效地扩增。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，用于所述第一靶的至少一个引物以比用于所述第二靶的所述引物的每个引物低的浓度存在。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，用于所述第一靶的至少一个引物具有比用于所述第二靶的所述引物的每个引物低的解链温度。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，用于所述第一靶的所述至少一个引物比用于所述第二靶的所述引物的每个引物短。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增步骤用用于所述第一靶的第一引物对和用于所述第二靶的第二引物对来执行，并且其中，所述第一引物对中的至少一个引物在所述分区中的浓度小于所述第二引物对中的每个引物的浓度。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述第一引物对中的每个引物在每个分区中的浓度小于所述第二引物对中的每个引物在所述分区中的浓度。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增步骤用用于所述第一靶的第一引物对和用于所述第二靶的第二引物对来执行，并且其中，所述第一引物对中的至少一个引物具有比所述第二引物对中的每个引物低的解链温度。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述第一引物对中的每个引物具有比所述第二引物对中的每个引物低的解链温度。

9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述第一引物对中的至少一个引物比所述第二引物对中的每个引物短。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述第一引物对中的每个引物比所述第二引物对中的每个引物短。

11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增步骤以多个热循环和第一引物对以及第二引物对来执行，所述第一引物对用于生成对应于所述第一靶的第一扩增子，且所述第二引物对用于生成对应于所述第二靶的第二扩增子，并且其中，每个热循环的退火温度允许所述第二引物对比所述第一引物对更有效结合。

12.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增步骤包括扩增所述第一靶以形成第一扩增子和扩增所述第二靶以形成第二扩增子的步骤，并且其中，所述第一扩增子具有与所述第二扩增子不同的长度。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述扩增步骤包括用相同的引物对扩增所述第一靶和所述第二靶的步骤。