[发明专利]方法、自我复制载体、测定试剂盒及分析装置

权利要求书

1.得到细胞的表观遗传的信息的方法，其中

将被检细胞的基因组上的待观察的特定的序列中的修饰的状态抄录到在上述被检细胞的核内的自我复制中由官能团的取代而对应的其序列上，

使用依赖于所述抄录的官能团的存在状况发生可检测的信号的自我复制载体得到细胞的表观遗传的信息，其中，上述自我复制载体是含下列(a)～(c)的自我复制载体：

(a)含下列序列的第1报告子基因表达单位：

含甲基可被取代的碱基，有依赖于上述碱基中的所述甲基的取代的程度的启动子活性，并且对于被检细胞的基因组上的待观察的特定的序列有相同性的目标核酸序列，

在上述目标核酸序列的下游功能性地连接，由上述目标核酸序列的活化而表达的编码报告子蛋白质的报告子基因，

在上述报告子基因的下游功能性地连接的转录终止信号序列，

(b)在上述第1报告子基因表达单位的下游连接的含下列序列的第2报告子基因表达单位：

含甲基可被取代的碱基，有依赖于上述碱基中的所述甲基的取代的程度的启动子活性，并且对于被检细胞的基因组上的待观察的特定的序列有相同性的目标核酸序列，

在上述目标核酸序列的下游功能性地连接，由上述目标核酸序列的活化而表达的编码报告子蛋白质的报告子基因，

在上述报告子基因的下游功能性地连接的转录终止信号序列，及

(c)与上述第1及第2报告子基因表达单位存在于相同核酸上的复制起始序列，

上述自我复制载体的上述第1报告子基因表达单位及上述第2报告子基因表达单位各自所含的上述目标核酸的甲基化状态互相不同，

所述方法包括：

(1)向被检细胞导入上述自我复制载体，

(2)通过在复制起始蛋白质表达的条件下培养上述被检细胞，使上述自我复制载体复制，

(3)检测各自来源于所述第1报告子基因表达单位及所述第2报告子基因表达单位的第1报告子蛋白质及第2报告子蛋白质及/或测定其表达量，

(4)比较上述(3)中得到的上述第1报告子蛋白质和上述第2报告子蛋白质的表达量，得到关于在所述被检细胞的基因组上的特定的序列中所含的核酸的甲基的取代的信息。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于，为了开始上述自我复制载体的自我复制，在上述被检细胞的核内，活化所述复制起始序列的复制起始蛋白质被表达。

3.权利要求2所述的方法，其特征在于，为了开始上述自我复制载体的自我复制，向上述被检细胞的核内导入含表达所述复制起始蛋白质的复制起始蛋白质单位的复制起始蛋白质基因表达载体。

4.权利要求2所述的方法，其特征在于，上述自我复制载体还含表达所述复制起始蛋白质的复制起始蛋白质单位。

5.权利要求2所述的方法，其特征在于，

上述自我复制载体还含：

在上述第1报告子基因表达单位的下游功能性地连接的IRES序列、

在上述IRES序列的下游功能性地连接的编码上述复制起始蛋白质的序列，

上述第1报告子基因表达单位的上述转录终止信号序列在编码上述复制起始蛋白质的序列的下游功能性地连接，

上述复制起始序列在上述转录终止信号序列的下游功能性地连接。

6.权利要求3所述的方法，其中上述复制起始蛋白质单位含：

编码所述复制起始蛋白质的序列，及

在其上游功能性地连接的组成型表达的启动子。

7.权利要求1所述的方法，其特征在于，上述目标核酸序列中的官能团可被取代的所述碱基是至少1个胞嘧啶及/或鸟嘌呤。

8.权利要求1所述的方法，其中上述官能团是甲基。

9.权利要求1所述的方法，其中上述报告子基因选自：荧光素酶基因、β-半乳糖苷酶基因、一氧化氮合成酶基因、黄嘌呤氧化酶基因、蓝色荧光蛋白质基因、绿色荧光蛋白质基因、红色荧光蛋白质基因及重金属结合蛋白质基因。