[发明专利]方法、自我复制载体、测定试剂盒及分析装置

说明书

本发明由实施方式提供得到细胞的表观遗传的信息的方法。此方法包括，将报告子核酸构建体导入被检细胞的核内，使报告子核酸构建体自我复制，检测在被检细胞中发生的信号的有无及/或大小，基于得到的结果，得到被检细胞的表观遗传的信息。报告子核酸构建体特征在于将被检细胞的基因组上的特定的序列中的修饰的状态抄录到被检细胞的在核内的自我复制中由官能团的取代对应的其序列上，依赖于抄录的官能团的存在状况发生可检测的信号。

【技术领域】

本发明的实施方式涉及得到细胞的表观遗传的信息的方法、判断细胞的特性的方法、判断药剂感受性的或选择药剂或免疫疗法剂的种类的方法、疾病的诊断方法、以及自我复制载体、测定试剂盒及分析装置。

【背景技术】

在基因的表达与多种因子相关。由那样的因子的存在或不在或者存在的量的变化而对象的健康状态被左右。另外，如果观察那样的因子的状态，则判断对象中的健康状态变得可能。

在关于基因的表达的因子中，有伴随构成基因组的DNA的碱基序列的变化的和不伴随DNA碱基序列的变化的。在伴随DNA的碱基序列的变化的中含多型或变异。另一方面，不伴随DNA碱基序列的变化的有关于表观遗传控制的变化。关于这样的多型及变异、以及表观遗传控制的信息(即，表观遗传的信息)在医疗、农业、渔业等的各种各样的领域中有用。在表观遗传的信息中有DNA的修饰、组蛋白的化学修饰、由非翻译性RNA的控制等。

例如，目前报告，得到对特定的碱基序列的甲基化等的修饰的有无或修饰量的变化等的表观遗传的信息对于医学有用。

关于DNA的甲基化的信息是有用的表观遗传的信息的1例。DNA 甲基化异常在多阶段的发癌过程中自早期被确认。另外，在初期肝癌中也确认目标基因群集中的甲基化。

基因组DNA的甲基化反应是指在细胞内由DNA甲基转移酶在基因组上的胞嘧啶附加甲基。细胞分裂时基因组复制，则复制的基因组在与复制前的基因组同位置的胞嘧啶发生甲基的附加。

现在，在检测DNA的甲基化的手段中，例如，有硫酸氢盐处理 PCR法、测序法、利用报告子载体的方法。例如，作为利用报告子载体的方法，报告有测定由时钟基因的DNA甲基化的昼夜节律控制结构，筛选昼夜节律障碍改善剂的方法。所述筛选法是制作染色体上整合在细胞内甲基化的已知的目标核酸序列的稳定表达细胞株，利用与细胞分裂时的基因组复制同时进行的甲基化反应，筛选昼夜节律障碍改善剂的方法。

【现有技术文献】

【专利文献】

专利文献1：特开2009-232761号公报

专利文献2：特开2012-60894号公报

【非专利文献】

非专利文献1：Yoshiura K et al.,Proc Natl Acad Sci U S A.1995, 92,7416-7419。

非专利文献2：Chen YL et al.,Biochem Biophys Res Commun. 2012,425(2),290-296

非专利文献3：Hayatsu H et al.,Biochemistry.1970,9,2858-2865。

非专利文献4：Gonzalgo ML et al.,Nucleic Acids Res.1997,25, 2529-2531。

非专利文献5：Herman JG et al.,Proc Natl Acad Sci U S A.1996, 93,9821-9826。

非专利文献6：Clark SJ et al.,Nucleic Acids Res.1994,22, 2990-2997。