[发明专利]新检测方法

权利要求书

1.一种检测样品中选自细胞角蛋白8、18和19组成的组的至少两种细胞角蛋白和/或其可溶性片段的方法，包括以下步骤：

-使所述样品接触固相，所述固相上固定有对细胞角蛋白8具有特异性的第一抗体和对细胞角蛋白18具有特异性的第二抗体，其中所述第一抗体为6D7，其由保藏号为ECACC 13031902的细胞系分泌，所述第二抗体为3F3，其由保藏号为ECACC 13031901的细胞系分泌；

-使所述样品中的细胞角蛋白和/或其可溶性片段结合到所述第一和第二抗体从而形成复合物；

-使所述复合物接触对细胞角蛋白8和18的二聚体具有特异性的第一标记抗体和任选的对细胞角蛋白19的第二表位具有特异性的第二标记抗体，其中所述第一标记抗体为M21，其由保藏号为ECACC 13032101的细胞系分泌，所述第二标记抗体为A53-B/A2；

-使所述标记抗体结合到所述复合物；和

-检测结合到所述复合物的所述标记抗体。

2.根据权利要求1的方法，其中所述固相上还固定有对细胞角蛋白19的第一表位具有特异性的第三抗体，所述第三抗体由保藏号为ECACC 13031903的细胞系分泌，且使所述形成的复合物还接触对细胞角蛋白19的第二表位具有特异性的第二标记抗体。

3.根据权利要求1的方法，其中所述抗体为单克隆抗体。

4.根据权利要求1的方法，其中所述第一标记抗体对细胞角蛋白18的α-螺旋2B 2(aa 414-429)具有特异性，所述第二标记抗体对细胞角蛋白19的α-螺旋2B 2(aa 311-335)具有特异性。

5.根据权利要求1或2的方法，其中所述第一抗体对α-螺旋2B(aa 340-365)具有特异性，所述第二抗体对α-螺旋2B(aa320-350)具有特异性，所述第三抗体对α-螺旋2B(aa340-370)具有特异性。

6.根据权利要求1的方法，其中对细胞角蛋白8具有特异性的所述第一抗体在总的固定抗体的组成中占20-40％，对细胞角蛋白18具有特异性的所述第二抗体在总的固定抗体的组成中占5-15％，对细胞角蛋白19具有特异性的所述第三抗体在总的固定抗体的组成中占50-70％。

7.根据权利要求6的方法，其中对细胞角蛋白8具有特异性的所述第一抗体在总的固定抗体的组成中占30％，对细胞角蛋白18具有特异性的所述第二抗体在总的固定抗体的组成中占10％，对细胞角蛋白19具有特异性的所述第三抗体在总的固定抗体的组成中占60％。

8.根据以上任一项权利要求的方法，其中检测样品中的细胞角蛋白8和18和/或其可溶性片段，包括以下步骤：

-使所述样品接触固相，所述固相上固定有对细胞角蛋白8具有特异性的第一抗体和对细胞角蛋白18具有特异性的第二抗体；

-使所述样品中的细胞角蛋白和/或其可溶性片段结合到所述第一和第二抗体从而形成复合物；

-使所述复合物接触对细胞角蛋白8和18的二聚体具有特异性的第一标记抗体；

-使所述标记抗体结合到所述复合物；

-检测结合到所述复合物的所述标记抗体。

9.根据权利要求1的方法，其中所述标记抗体用辣根过氧化物酶标记，并且通过加入能够被所述辣根过氧化物酶转化成可检测物质的底物来进行检测。

10.根据权利要求9的方法，其中所述底物被所述辣根过氧化物酶转化为发色物质。

11.根据权利要求10的方法，其中所述底物为TMB(3,3’,5,5’-四甲基联苯胺)。

12.一种定量测定样品中的至少两种细胞角蛋白的可溶性片段的方法，所述细胞角蛋白选自细胞角蛋白8、18和19组成的组，所述方法包括以上任一项权利要求的方法，进一步包括以下步骤：

-将结合的对角蛋白8和18的二聚体具有特异性的第一标记抗体和对细胞角蛋白19具有特异性的第二标记抗体的量与细胞角蛋白8、18和/或19的可溶性片段的量进行定量关联。