[发明专利]干细胞培养用培养基

说明书

由脱脂肪酸处理等而含有脂肪酸负载量降低的白蛋白的干细胞培养用培养基；干细胞培养用培养基的制造方法、等，其特征在于，对白蛋白进行脱脂肪酸处理而制备脂肪酸负载量降低的白蛋白，将该制备的白蛋白添加到培养基。

【技术领域】

本发明涉及干细胞培养用培养基、所述培养基的制造方法等。

【背景技术】

以往、干细胞(胚胎干细胞、人工多能性干细胞(iPS细胞)等)的培养使用含有血清的培养基进行。例如，胎牛血清(FBS)等作为对于细胞增殖重要的添加物在细胞培养中广泛使用。但是将培养后的干细胞以医疗目的使用时，异种来源成分有成为血液媒介病原菌的感染源或异种抗原的可能性。另外由血清的批间差而也有培养结果发生偏差的可能性。因此，近年，使用化学组成明了的培养基(chemically defined medium)培养干细胞成为主流，进行无血清培养基的开发。

作为在无血清培养基中重要性高的成分之一，可举出白蛋白。通过添加白蛋白，可期待培养基性能的稳定维持效果。作为细胞培养用，有数种的白蛋白在市售。但是，在细胞培养、特别干细胞的培养中，不是全部的白蛋白有同等的效果，由白蛋白的品质而培养成绩受影响。

另一方面，作为白蛋白的纯化方法，已知活性炭处理、离子交换、加热处理等(非专利文献1、4、5及6)。另外，有说棕榈酸在间质干细胞中诱导凋亡的报告(非专利文献2)、及说通过添加在iPS细胞中抑制油酸合成酶的物质而棕榈酸蓄积，ER应激-凋亡被诱导的报告(非专利文献3)。

在专利文献1中记载，为了白蛋白的稳定化而在培养基中使用辛酸，此辛酸对于干细胞培养有害。但是，未见为了白蛋白的稳定化而使用长链脂肪酸的记载，另外，未见显示长链脂肪酸相比作为中链脂肪酸的辛酸对于干细胞培养更有害，对于未分化能力维持有不良影响的数据或记载。另外，在专利文献2中记载，干细胞用培养基中含无脂肪酸的白蛋白。在该文献中无关于在培养干细胞上自白蛋白除去何程度的脂肪酸就充分的记载，另外，由于作为无脂肪酸的白蛋白使用市售的Proliant公司制的牛血清来源白蛋白，未进行从白蛋白的脂肪酸除去的复杂性的探讨。

【现有技术文献】

【专利文献】

专利文献1：国际公开第2013/006675号

专利文献2：国际公开第2013/134378号

【非专利文献】

非专利文献1：J.Biological Chemistry 1968,212(2)，173-181

非专利文献2：Endocrinology November 2012,153(11)，5275-5284

非专利文献3：Cell Stem Cell 2013,12,167-179

非专利文献4：BioChim.Biophy.Acta 1970,221,376-378

非专利文献5：Biologics 1997,25,391-401

非专利文献6：Brazilian journal of medicinal and biological research1998,31,1383-1388

【发明内容】

【发明要解决的技术课题】

本发明解明由添加到培养基的白蛋白的品质的差异的培养成绩的偏差的机制，旨在提供培养成绩更好的干细胞培养用培养基，提供制造所述培养用培养基的方法，还提供选择适宜于添加到培养用培养基的白蛋白的方法，另外，提供干细胞培养用培养基添加剂，再者，提供可使干细胞维持在未分化状态的培养系统。

【解决课题的技术方案】