[发明专利]用于测定铝盐制备物的内毒素含量的方法

说明书

发明领域

本发明提供测定用于药物中、具体而言用作疫苗中的佐剂的铝盐制备物中的内毒素含量的方法。

发明背景

肠胃外药物需要致热原或内毒素(LAL)测试。经典的内毒素测定不能用于测试铝盐的内毒素含量。添加至产品中的内毒素对照由于其与铝盐的相互作用的特性而没有回收。测定有效性标准需要回收且能够测量大量铝浓缩物(bulkaluminiumconcentrations)中的对照内毒素。鉴于该相互作用，通常认为标准内毒素测试不适合于铝盐佐剂中的内毒素测试。唯一适合于测定内毒素的测试是涉及将铝盐注射入兔的兔致热原测试。需要改进的方法。

发明概述

本发明提供准确地定量铝盐制备物中的内毒素的方法。本发明提供用于测定用于药物中(具体而言用作疫苗中的佐剂)的铝盐制备物中的内毒素含量的方法，其包括以下步骤：

a)混合铝盐与解吸缓冲液，由此从铝盐解吸任何内毒素；

b)将所述铝盐与所述内毒素分离；和

c)测量内毒素的量。

本发明进一步提供制备用于测定用于药物中(具体而言用作疫苗中的佐剂)的铝盐制备物中的内毒素含量的方法的解吸缓冲液的方法，其包括以下步骤：

a)混合如本文所定义的碱、如本文所定义的金属螯合剂和水；任选地

b)搅拌混合物(具体而言持续等于或大于30秒，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15分钟)；和任选地

c)将混合物孵育等于或大于5、10、15、20、25或30分钟。

详述

本发明提供用于测定用于药物中(具体而言用作疫苗中的佐剂)的铝盐制备物中的内毒素含量的方法，其包括以下步骤：

a)混合铝盐与解吸缓冲液，由此从铝盐解吸任何内毒素；

b)将所述铝盐与所述内毒素分离；和

c)测量内毒素的量。

本发明提供用于测定用于药物中(具体而言用作疫苗中的佐剂)的铝盐制备物中的内毒素含量的方法，其包括以下步骤：

a)混合铝盐与解吸缓冲液，由此从铝盐解吸任何内毒素；

b)离心混合物，由此将所述铝盐与所述内毒素分离；和

c)测量上清液的内毒素含量。

本发明进一步提供用于测定用于药物中(具体而言用作疫苗中的佐剂)的铝盐制备物中的内毒素含量的方法，其包括以下步骤：

a)混合铝盐与解吸缓冲液，由此从铝盐解吸任何内毒素；

b)离心混合物，由此将所述铝盐与所述内毒素分离；

c)将上清液转移至无致热原容器；和

d)测量所述上清液的内毒素含量。

术语“内毒素”在本文中用于指在欧洲药典5.1.10中定义的，即内毒素被视为源自革兰氏阴性细菌的脂多糖类(LPS)和/或脂寡糖类(LOS)。

混合步骤之后和分离/离心步骤之前，可以孵育铝盐制备物和解吸缓冲液，以确保解吸结合至铝盐的任何内毒素。因此，提供本发明的方法，其中将混合物铝盐和解吸缓冲液孵育大于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时。在具体实施方案中，孵育期为小于96或72小时，即孵育期为1小时至96小时、5小时至72小时、10小时至48小时、15小时至36小时或20小时至28小时。在一个具体实施方案中，混合物在孵育步骤过程中没有搅拌。

以1:9至9:1，例如2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:2或8:2的比率合适地混合铝盐制备物和解吸缓冲液。在具体实施方案中，以3:7、4:6、5:5、6:47:3之间，具体而言4:6、5:5和6:4的比率混合铝盐制备物和解吸缓冲液。

本发明的方法可以在允许从铝盐解吸内毒素的任何温度进行。合适地，提供本发明的方法，其中所述孵育在10℃至70℃，例如20℃至65℃、20℃至60℃、15℃至30℃、17℃至28℃、19℃至26℃、21℃至23℃或在约室温(约22℃)进行。

本发明的方法可以包括搅拌铝盐和解吸缓冲液的混合物以确保解吸缓冲液与铝组合物混合的步骤。合适地，提供本发明的方法，其中铝盐和解吸缓冲液的混合物在步骤a)之后搅拌多于30秒、40秒、50秒、1分钟、1分钟30秒或2分钟。