[发明专利]包含Gc-巨噬细胞活化因子的组合物及其用途

说明书

发明领域

本发明涉及稳定的药物组合物，所述稳定的药物组合物包含Gc巨噬细胞活化因子 (GcMAF)。本发明特别涉及储存稳定的药物组合物，所述储存稳定的药物组合物包含GcMAF 和至少一种药学上可接受的表面活性剂和/或具有表面活性的合成的水溶性聚合物，以及 其用于治疗与巨噬细胞活化相关的疾病的用途。

发明背景

巨噬细胞活化在炎症发展和免疫应答调节中起重要作用。与炎症相关的巨噬细胞 活化需要B淋巴细胞和T淋巴细胞和血清维生素D结合蛋白(还称为“组特异性组分”或Gc蛋 白)的参与。

Gc蛋白是人血浆α-2巨球蛋白级分的多态糖蛋白，具有52kDa的表观分子量，通常 构成人血浆中约0.5％的蛋白。Gc蛋白携带包含具有双分支半乳糖和唾液酸末端的N-乙酰 半乳糖胺的三糖。该寡糖被炎症引发的B淋巴细胞的可诱导的膜β-半乳糖苷酶水解以产生 巨噬细胞前体活化因子。巨噬细胞前体活化因子继而被T淋巴细胞的膜Neu-1唾液酸酶水解 以产生巨噬细胞活化因子(GcMAF)。用固定化的β-半乳糖苷酶和唾液酸酶逐步处理纯化的 Gc蛋白也被显示产生GcMAF。

已经显示GcMAF具有破坏肿瘤的作用。证明了因为血清Gc蛋白在癌症患者中被由 癌细胞分泌的血清α-N-乙酰半乳糖苷酶(Nagalase)去糖基化，GcMAF活性在这些患者中被 消除或降低。因此，去糖基化的Gc蛋白不转化为GcMAF，且巨噬细胞活化被降低或消除。施用 外源GcMAF到患有黑素瘤、前列腺癌、结肠直肠癌或转移性乳腺癌的癌症患者显示出GcMAF 通过克服活性巨噬细胞不足的治疗效应(Yamamoto等，2008，Int.J.Cancer,122:461-467； Yamamoto等，Trans.Oncol.2008,1:65-72)。在用GcMAF治疗的感染HIV的和骨硬化的患者中 观察到对巨噬细胞活化的相似效应。

美国专利号5,177,002公开了产生巨噬细胞活化因子的方法，该方法包括使糖基 化的人组特异性组分与β-半乳糖苷酶或β-半乳糖苷酶与唾液酸酶、α-甘露糖苷酶或其混合 物的组合体外接触，并获得巨噬细胞活化因子。美国专利号5,177,002还公开了用于在有相 应需要的个体中诱导巨噬细胞活化的方法，该方法包括对个体施用由此产生的人巨噬细胞 活化因子。

WO93/07288公开了用于产生有效的巨噬细胞活化因子的方法，其中使动物维生 素D结合蛋白在体外与(i)β-半乳糖苷酶或(ii)β-半乳糖苷酶与唾液酸酶、α-甘露糖苷酶或 其混合物的组合接触。WO93/07288还公开了用于活化巨噬细胞的方法，该方法包括对动物 施用由此产生的巨噬细胞活化因子。

WO96/40903公开了维生素D结合蛋白(Gc蛋白)及其小结构域(还被称为结构域 III)经由杆状病毒载体的克隆。克隆的Gc蛋白和克隆的结构域III用固定化的β-半乳糖苷 酶和唾液酸酶处理以分别产生巨噬细胞活化因子，GcMAFc和CdMAF。WO96/40903还公开了 巨噬细胞活化因子用于治疗癌症、人类免疫缺陷病毒(HIV)感染和骨质疏松的用途。

WO2012/137199公开了包含基本上缺乏糖苷酶的巨噬细胞活化因子(MAF)的药物 组合物，及使用其治疗癌症或感染HIV的患者的方法。

Pihl等(Basic&ClinPharm&Toxicol.,2010,107:853-860)公开了对纯化的血浆 来源的人Gc蛋白进行的临床前毒理学实验，并指出发现了Gc蛋白在5％麦芽糖的存在下以 磷酸盐缓冲的盐水(PBS)中约10mg/ml的浓度稳定四年，完全保留肌动蛋白结合能力且Gc蛋 白的量无显著变化。

Pacini等(CancerImmunol.Immunother.,2011,60:479-485)评价了不同GcMAF制 剂在鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)测定中它们抑制PGE₁-刺激的血管生成的效力，并表明在25℃储 存15天减少了约50％的GcMAF效力。

对保持GcMAF化学稳定性和生物活性的储存稳定的GcMAF药物组合物存在未满足 的需求。

发明概述