[发明专利]双生物素化标签

权利要求书

1.一种组合物，其包含：在N-末端或C-末端有两个串联生物素连接酶识别序列的蛋白质，所述生物素连接酶识别序列各自具有与之共价连接的生物素部分，所述的两个生物素连接酶识别序列和两个生物素部分一起形成第一双生物素标签；固体支持物，所述固体支持物与第二双生物素标签共价偶联，所述第二双 生物素标签指与所述固体支持物连接的两个共价连接的生物素；和四价生物素结合试剂，所述两个双生物素标签结合所述四价生物素结合试剂。

2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述蛋白质是聚合酶。

3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述固体支持物是珠。

4.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述固体支持物是阵列。

5.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述第一双生物素标签中的两个生物素部分分隔20-60埃。

6.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述四价生物素结合剂是亲和素。

7.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述四价生物素结合剂是链霉亲和素、去糖基化的亲和素、捕集亲和素或抗生物素蛋白。

8.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述四价生物素结合试剂是链霉亲和素四聚体。

9.如权利要求8所述的组合物，其特征在于，所述链霉亲和素四聚体包含第一链霉亲和素二聚体和第二链霉亲和素二聚体，所述第一链霉亲和素二聚体结合至所述第一双生物素标签的两个生物素部分，所述第二链霉亲和素二聚体结合至所述第二双生物素标签的两个生物素部分。

10.一种共定位蛋白质与固体支持物的方法，所述方法包括：

a)提供在N-末端或C-末端有两个串联生物素连接酶识别序列的蛋白质，所述生物素连接酶识别序列各自具有与之共价连接的生物素部分，所述的两个生物素连接酶识别序列和两个生物素部分一起形成第一双生物素标签；

b)将固体支持物共价连接至第二双生物素标签，所述第二双 生物素标签指与所述固体支持物连接的两个共价连接的生物素；

c)将所述蛋白质结合至四价生物素结合试剂，从而产生包含与所述四价生物素结合试剂结合的所述蛋白质的第一复合物；并且

d)将载有所述第二双生物素标签的所述固体支持物暴露于所述第一复合物，从而产生包含与所述第一复合物结合的所述固体支持物的第二复合物。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在所述暴露固体支持物之前分离所述第一复合物。

12.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述方法还包括分离所述第二复合物。

13.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述四价生物素结合剂是亲和素。

14.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述四价生物素结合剂是链霉亲和素、去糖基化的亲和素、捕集亲和素、抗生物素蛋白。

15.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述四价生物素结合试剂是链霉亲和素四聚体。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述链霉亲和素四聚体包含第一链霉亲和素二聚体和第二链霉亲和素二聚体，所述第一链霉亲和素二聚体与所述第一双生物素标签的两个生物素部分结合，所述第二链霉亲和素二聚体与所述第二双生物素标签的两个生物素部分结合。