[发明专利]双生物素化标签

说明书

提供了多生物素化的反应物，其可用于二价复合物，供于多种应用如共定位、标记、固定化和纯化。也提供可构建、纯化和使用双生物素化的反应物的方法。在某些实施方式中，2个双生物素化的反应物结合至单个链霉亲和素四聚体以提供具有相对于双生物素化的反应物的化学计量为1:1的复合物。

相关申请的交叉参考

本申请要求2013年6月14日提交的美国临时申请号61/835,311的权益，该申请通过引用全文纳入本文用于所有目的。

关于联邦资助研究的声明

未应用。

背景技术

分子生物学中的一个共同任务是鉴定并定量复杂混合物中蛋白质的存在。例如，为了鉴定感兴趣蛋白质的表达水平，可进行Western印迹，其中在凝胶上运行蛋白质提取物并且用针对感兴趣蛋白质的限定表位的抗体染色。限定表位可以是在天然蛋白质中发现的特定序列或结构，或者可以是在克隆期间导入的标签，例如“FLAG标签”，可购得针对其的抗体。使用对与蛋白质结合的一抗有特异性的过氧化物酶偶联的二抗来生成可检测的信号。这种方法是繁琐的，需要用于从细胞提取物中纯化蛋白质的更合理化的方法。

将光学标记物连接到蛋白质可以是检测和定量的替代策略，然而，这一般需要对蛋白质内残基的化学修饰。通过赖氨酸或半胱氨酸残基连接染料通常改变了活性或降低溶解性，使得带标记的蛋白质难以或不可能被纯化。荧光蛋白质标签具有多种光谱性质，例如Shaner等，(2005)Nature Methods 2(12):905-909所述，其通过引用全文纳入本文用于所有目的，但是这些标签对于单分子实验而言是次优的。

化学合成DNA的能力使得可能构建在自然中未发现的肽和蛋白质并且可用于多种方法，这些方法在其它情况中难以或不可能实施。例如，大量描述受体蛋白质重组表达的公开的专利文献。参见，例如，PCT专利公开号91/18982以及美国专利号5,081,228和4,968,607，其描述了编码IL-1受体的重组DNA分子；美国专利号4,816,565、4,578,335和4,845,198，其描述了与IL-2受体相关的重组DNA和蛋白质；PCT专利公开号91/08214，其描述了与核酸相关的EGF受体；PCT专利公开号91/16431和美国专利号4,897,264，其描述了干扰素γ受体与相关的蛋白质和核酸；欧洲专利局(EPO)公开号377,489，其描述了C5a受体蛋白质；PCT专利公开号90/08822，其描述了EPO受体和相关的核酸；PCT专利公开号92/01715，其描述了MHC受体；和1992年9月18日提交的美国专利申请系列号947,339，其描述了如何从细胞表面上切下含HPAP的受体以及保留的锚定序列如何可用作用于固定受体的抗体的识别序列。各自通过引用纳入本文用于所有目的的这些文献中的几种描述了如何分离特定受体蛋白质(或编码该蛋白质的基因)以及可以自然或天然受体不可使用的方式使用的受体变体。