[发明专利]低pH的HNL突变体

权利要求书

1.来自Rosaceae科成员的重组R-羟基腈裂解酶(R-HNL5)，其在对应于根据SEQIDNO：1的来自Prunusamygdalus之成熟PaHNL5的氨基酸序列中所示V317和N496的氨基酸位置处包含替换。

2.根据权利要求1所述的重组R-HNL5，其在对应于根据SEQIDNO：1的来自Prunusamygdalus之成熟PaHNL5中的第317和N496位的位置处包含氨基酸替换V317A和选自N496S或N496A的氨基酸替换。

3.根据权利要求1或2所述的重组R-HNL5，其在pH2.5左右或者更低时稳定至少1小时。

4.根据在前权利要求中任一项所述的重组R-HNL5，其中所述Rosaceae科成员选自：Prunusamygdalus、Prunusseotina、Prunusavium、Prunuslaurocerasus、Prunuslyonii、Prunusarmaniaca、Prunuspersica、Prunusdomestica、Prunusmume、Maluscommunis、Maluspumila和Cydoniaoblonga。

5.根据在前权利要求中任一项所述的重组R-HNL5用于由脂族、芳族或杂芳族醛或酮制备对映体纯的氰醇的用途，优选地是用于在pH2.5下的1天的催化反应后制备至少83％的对映体过量。

6.根据权利要求5所述的用途，其用于制备R-泛酸内酯。

7.用于生产对映体纯的氰醇的方法，其包括：在氰基供体的存在下，通过根据权利要求1-4中任一项所述的重组R-HNL5将选自脂族、芳族或杂芳族醛或酮的底物转化为相应的氰醇，所述转化在pH2.5左右且15-25℃之间的温度下进行，优选地，其中反应开始时的温度为15℃左右并在75％的反应时间之后改变为25℃，以及优选地其中pH在2.5和3.0之间循环。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述底物向(RS)-氰醇的转化率为100％，其包括：在15℃下pH在3.0和2.5之间循环。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其中连续或半连续地添加所述底物，优选地其中经多于1小时的时间添加所述底物，更优选地在6小时内添加所述底物。

10.根据权利要求7或8所述的方法，其中在1小时内添加所述底物且重组R-HNL的量高于1kAMU/g/h底物剂量。