[发明专利]融合聚合酶有效
| 申请号： | 201480038083.1 | 申请日： | 2014-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN105452451B | 公开（公告）日： | 2020-06-05 |
| 发明（设计）人： | 王岩;M·程 | 申请（专利权）人： | 生物辐射实验室股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/00 | 分类号： | C12N9/00 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 余颖;沈端 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 融合 聚合 | ||
1.一种具有至少聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性的多肽，所述多肽包含与异源性聚合酶相连的5’-3’外切核酸酶结构域，所述异源性聚合酶天然不具有5’-3’外切核酸酶活性，所述异源性聚合酶是B家族聚合酶，所述5’-3’外切核酸酶结构域是侧翼内切核酸酶5’-3’外切核酸酶结构域。
2.如权利要求1所述的多肽，所述聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性是热稳定的。
3.如权利要求1或2所述的多肽，所述多肽还包含异源性序列非特异性双链DNA结合结构域或序列非特异性单链DNA结合结构域。
4.如权利要求3所述的多肽，所述异源性序列非特异性双链DNA结合结构域是Sso7 DNA结合结构域或Sso7样DNA结合结构域。
5.如权利要求4所述的多肽，所述异源性序列非特异性双链DNA结合结构域与SEQ IDNO: 27、28、29、30或31中任一种相同。
6.如权利要求1所述的多肽，所述5’-3’外切核酸酶结构域和所述B家族聚合酶由接头连接。
7.如权利要求6所述的多肽，所述接头是氨基酸接头。
8.如权利要求7所述的多肽，所述氨基酸接头长1-15个氨基酸。
9.如权利要求1所述的多肽，所述5’-3’外切核酸酶结构域的羧基端通过接头连接所述B家族聚合酶的氨基端。
10.如权利要求1所述的多肽，所述多肽具有3’-5’外切核酸酶活性。
11.如权利要求1所述的多肽，所述多肽缺少3’-5’外切核酸酶活性。
12.如权利要求11所述的多肽，所述多肽包含至少一个消除3’-5’外切核酸酶活性的点突变。
13.如权利要求11所述的多肽，所述多肽包含消除3’-5’外切核酸酶活性的缺失。
14.如权利要求1所述的多肽，所述多肽与一种试剂结合，所述试剂阻止所述聚合酶活性直至所述多肽被加热。
15.如权利要求14所述的多肽，所述试剂是一种或多种与所述聚合酶结合的抗体。
16.如权利要求14所述的多肽，所述试剂是可逆共价化学修饰。
17.一种包含权利要求1-16中任一项所述的多肽的试剂盒。
18.如权利要求17所述的试剂盒，所述试剂盒还包含逆转录酶。
19.一种包含权利要求1-16中任一项所述的多肽的反应混合物。
20.如权利要求19所述的反应混合物，所述反应混合物还包含多核苷酸引物。
21.如权利要求19或20所述的反应混合物，所述反应混合物包含样品核酸。
22.如权利要求19或20所述的反应混合物，所述反应混合物不包含样品核酸。
23.如权利要求19或20所述的反应混合物，所述反应混合物还包含逆转录酶。
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