[发明专利]通过生长测量的质谱法抗药性测定

权利要求书

1.一种用质谱测定微生物对抗生素的抗药性的方法，其中在含有所述抗生素的基体中培养所述微生物，并且在包含所述抗生素的基体中培养之后通过基质辅助激光解吸电离MALDI采集所述微生物的质谱MS_cum，其特征在于：

将至少一种参考物质在制备用于采集所述质谱MS_cum的MALDI样本期间按剂量添加，并且在所述质谱MS_cum中共测；

在包含抗生素的培养基中培养后，通过质谱MS_cum确定微生物的数量，然后将此数量与在培养前对应测定的微生物或标准化的微生物数量和/或在无抗生素培养后对应测定的微生物数量进行比较，从而测定微生物的生长；以及

在包含所述抗生素的培养基中的微生物生长表明对所述抗生素有抗药性，

其中使用所述至少一种参考物质的一种或多种参考信号的强度，根据质谱的一种或多种微生物信号的强度测定微生物的数量。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在开始培养时将所述微生物的数量标准化，在培养后使用一个或多个参考信号的强度从所述质谱MS_cum中的一个或多个微生物信号的强度来测定所述微生物的数量，并且如果所述微生物的数量超过指定的极限值，则将所述微生物视为具有抗药性。

3.根据权利要求1所述的方法，其中

在不含所述抗生素的基体内另外培养所述微生物；

在无抗生素培养后采集所述微生物的质谱MS_sine，其中将所述至少一种参考物质在制备用于采集所述质谱MS_sine的质谱MALDI样本期间按剂量添加，并且在所述质谱MS_sine中共测；以及

如果使用所述质谱MS_cum和MS_sine的一个或多个参考信号的强度，从所述质谱MS_cum和MS_sine的一个或多个微生物信号的强度得出的微生物数量的相对差异或绝对差异小于指定的极限值，则将所述微生物视为具有抗药性。

4.根据权利要求1所述的方法，其中

在培养前采集另外微生物质谱MS₀；

将所述至少一种参考物质在制备用于采集所述另外质谱的质谱MALDI样本期间按剂量添加，并且在所述另外质谱中共测；以及

如果使用所述质谱MS_cum的一个或多个参考信号的强度，从所述质谱MS_cum的一个或多个微生物信号的强度测定的微生物数量显著超过通过使用所述质谱MS₀的一个或多个参考信号的强度，从所述质谱MS₀的一个或多个微生物信号的强度测定的微生物数量，则将所述微生物视为具有抗药性。

5.根据权利要求2至4之一所述的方法，其中所述微生物的数量作为商由质谱测定，其中所述商由以下之一得出：

微生物信号强度与参考信号强度或多个参考信号的总和强度，

多个微生物信号的总和强度与参考信号强度或多个参考信号的总和强度，

质谱的一个区域中或全部质谱中的所有信号的总和强度与参考信号强度或多个参考信号的总和强度。

6.根据权利要求1至4之一所述的方法，其中所述至少一种参考物质的质量介于10千道尔顿和20千道尔顿。

7.根据权利要求1至4之一所述的方法，其中在各自含有不同抗生素的多种培养基内同时培养所述微生物，并且对每种培养基采集所述微生物的质谱MS_cum和所述参考物质的质谱MS_cum。

8.根据权利要求1至4之一所述的方法，其中在各自含有不同浓度的抗生素的多种培养基内同时培养所述微生物，并且对每种培养基采集所述微生物的质谱MS_cum和所述参考物质的质谱MS_cum。