[发明专利]珠型软骨细胞治疗剂的制造方法

说明书

本发明涉及珠型软骨细胞治疗剂的制造方法，更详细而言涉及可容易、且稳定地大量制造均一的优质的软骨组织的无支持物的珠型软骨细胞治疗剂的制造方法，其包括(a)将软骨细胞和/或具有软骨分化能力的细胞分注于具有V字形底壁的96‑孔深孔板(deep well plate)的阶段；(b)离心所述板的阶段；(c)将所述板在温育器中进行3维培养的阶段；及(d)从各自的孔回收颗粒的阶段；及涉及由所述方法制造的向软骨损伤以注入式简便地移植而具有修复损伤的有效性的无支持物的珠型软骨细胞治疗剂。

【技术领域】

本发明涉及珠型软骨细胞治疗剂的制造方法，更详细而言涉及可反复再现、可容易、且稳定地大量制造均一的优质的软骨组织的无支持物的珠型软骨细胞治疗剂的制造方法，包括(a)将软骨细胞和/或具有软骨分化能力的细胞分注于具有V字形底壁的96-孔深孔板(deep well plate)的阶段；(b)离心所述板的阶段；(c)将所述板在温育器中进行3维培养的阶段；及(d)从各自的孔回收颗粒的阶段；及涉及由所述方法制造的向软骨损伤以注入式简便地移植而具有修复损伤的有效性的无支持物的珠型软骨细胞治疗剂。

【背景技术】

软骨组织是无血管组织，组织中细胞的比率非常低，从而自然再生非常有限制性。1994年Brittberg等报告了将患者自身的关节软骨细胞分离，增殖而向软骨损伤部移植的自我软骨细胞移植术(ACI，autologous articular chondrocyte implantation)方法后，ACI法被用于关节软骨损伤治疗而在长期观察中也报告成功的结果，但在高龄患者和大尺寸的损伤中不能再现正常关节软骨的结构性特征或构成。传统的ACI(第1代ACI)的限制点是以骨膜作为盖而使悬浮液状态的细胞固定到损伤部位的相当地侵袭性的移植方法，移植后细胞的生存率减小及软骨细胞的表示型(phenotype)不能维持的点，物理强度脆弱等被指为其原因，为克服这样的限制点，开发出了将凝胶，膜，3维支持物作为细胞递送系统利用的作为第2代ACI技术的组织工程学软骨(Hutmacher等，2000；Adkisson等，2001；Ochi等，2001；Cancedda等，2003)。

在组织工程学软骨制造中，支持物向软骨细胞提供3维系统而维持软骨细胞的表型，促进透明软骨性细胞外基质(ECM)生产。不仅如此，向软骨损伤部位递送细胞，向移植部位提供物理性支持而保护细胞免于负荷的力。目前利用多种合成或天然成分的材料开发用于组织工程学的支持物，但从适用于临床的侧面看，则异种及同种来源天然材料可诱发免疫反应，合成材料的情况下，也生成有害的分解产物，所以从安全性侧面不自由。另外，将软骨细胞接种于支持物，则可分布于大部分支持物的外廓，软骨细胞合成，分泌的细胞外基质在支持物的外廓形成壳(shell)而阻碍营养分，废物及气体的扩散及交换，结果导致内部细胞的凋亡等。尽管在几例研究中使用支持物成功制造了组织工程学软骨，但还留有很多细胞与活体材料的相互作用，活体材料的不规则的分解性，生物相容性，不均匀的细胞分布，移植后组织工程学软骨和周边软骨的连接(结合)不足等还得解决的课题(Sittinger等，1996；Grande等，1997；Nehrer等，1998；Sims等，1998；Hutmacher等，2000；Ochi等，2001；Naumann等，2004；Park等，2006；Wolf等，2008)。