[发明专利]制备抗人乳头瘤病毒抗原的T细胞的方法

说明书

公开了制备分离的人乳头瘤病毒(HPV)‑特异性T细胞群的方法，其包括将HPV阳性肿瘤样品分成多个碎块；分别培养所述多个碎块；从培养的多个碎块中获得T细胞；检测用于特异性自体HPV阳性肿瘤识别的T细胞；选择显示出特异性自体HPV阳性肿瘤识别的T细胞；以及扩增所选择的T细胞数目以产生用于过继性细胞疗法的HPV特异性T细胞群。还公开了采用上述T细胞治疗或者预防癌症的相关方法。

相关申请的交叉引用

本专利申请要求于2013年7月15日提交的美国临时专利申请第61/846,161号的权益，所述临时专利申请通过引用整体并入本文。

关于联邦政府资助研究与开发的声明

本发明是由美国国立卫生研究院国家癌症研究所在政府支持下完成的，项目编号为BC010984-05。政府拥有本发明的某些权利。

发明背景

一些癌症类型，例如宫颈癌的主要原因是人乳头瘤病毒(HPV)感染。尽管在诸如化疗的治疗中取得进展，但包括HPV相关癌症在内的许多癌症的预后可能很差。因此，存在对癌症，特别是HPV相关癌症的其他治疗的未得到满足的需求。

发明概述

本发明的实施方案提供了制备HPV特异性T细胞群的方法，所述方法包括：将HPV阳性肿瘤样品分成多个碎块；在仅存在一种细胞因子的情况下分别培养多个碎块；从培养的多个碎块中获得T细胞；检测用于特异性自体HPV阳性肿瘤识别和HPV抗原识别中的一种或两种的T细胞；选择显示出特异性自体HPV阳性肿瘤识别和HPV抗原识别中的一种或两种的T细胞；以及扩增所选择的T细胞数目以产生HPV特异性T细胞群。

本发明的另一个实施方案提供了制备HPV特异性T细胞群的方法，该方法包括：将HPV阳性肿瘤样品分成多个碎块；分别培养多个碎块；从培养的多个碎块中获得T细胞；检测用于特异性自体HPV阳性肿瘤识别和HPV抗原识别中的一种或两种的T细胞；选择显示出特异性自体HPV阳性肿瘤识别和HPV抗原识别中的一种或两种的T细胞；以及采用(i)OKT3抗体和(ii)白细胞介素(IL)-2中的一种或两种扩增所选择的T细胞数目以产生HPV特异性T细胞群。

本发明的又一实施方案提供了治疗或预防哺乳动物中的癌症的方法，该方法包括：将HPV阳性肿瘤样品分成多个碎块；分别培养多个碎块；从培养的多个碎块中获得T细胞；检测用于特异性自体HPV阳性肿瘤识别和HPV抗原识别中的一种或两种的T细胞；选择显示出特异性自体HPV阳性肿瘤识别和HPV抗原识别中的一种或两种的T细胞；扩增所选择的T细胞数目以产生用于过继性细胞疗法的HPV特异性T细胞群；以及以有效治疗或预防哺乳动物中的癌症的量向哺乳动物施用扩增数目的T细胞。

附图简述

图1A是显示在与靶标gp100肽库(有阴影的柱)或HPV 18E7肽库(无阴影的柱)共培养后，由1号患者的22个肿瘤碎块(F1-F22)产生的效应肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)或黑色素瘤TIL分泌的干扰素-γ(IFN-γ)(pg/mL)的图。

图1B是显示在与靶自体肿瘤细胞系(无阴影的柱)或624细胞(黑色素瘤细胞系)(有阴影的柱)共培养后，效应黑色素瘤TIL或由1号患者的22个肿瘤碎块(F1-F22)产生的TIL分泌的IFN-γ(pg/mL)的图。

图2A是显示在与靶自体肿瘤细胞(有阴影的柱)、自体组织的外周血单核细胞(PBMC)(有正斜线阴影的柱)，与所有I类基因座匹配的肿瘤细胞(有反斜线阴影的柱)，HLA不匹配的HeLa细胞(有纵条纹的柱)或HLA不匹配的CaSki细胞(有横条纹的柱)共培养后，由1号患者的F16、F17或F22肿瘤碎块产生的效应TIL，或给予患者用于治疗的细胞(“输液袋”)分泌的IFN-γ(pg/mL)的图。

图2B是显示在单独培养(无肿瘤)或与用针对HLA-A、HLA-B、HLA-C的沉默RNA或针对不相关靶标的RNA(非靶向)的自体肿瘤细胞共培养后，由1号患者的效应TIL分泌的IFN-γ(pg/mL)的图。