[发明专利]制备眼前段组织的方法

权利要求书

1.包含眼前段组织或其部分结构或其前体组织的细胞聚集体的制备方法，所述方法包括：

(a)在不存在骨形态发生因子信号转导途径激活物质的情况下悬浮培养多能干细胞的聚集体，和

(b)在骨形态发生因子信号转导途径激活物质存在下，在除了骨形态发生因子信号转导途径激活物质之外不含模式形成因子的培养基中悬浮培养步骤(a)中培养的聚集体，直至在所述聚集体中形成广谱细胞角蛋白阳性的角膜上皮前体组织和/或L-Maf阳性的晶状体基板，

其中步骤(a)和(b)的悬浮培养在不存在饲养细胞的条件下进行，和

其中所述骨形态发生因子信号转导途径激活物质是BMP4。

2.根据权利要求1所述的方法，其中BMP4具有1-5nM的浓度。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤(a)和(b)的悬浮培养完全或部分地在碱性成纤维细胞生长因子存在下进行。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述多能干细胞是胚胎干细胞或诱导的多能干细胞。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述多能干细胞来源于人。

6.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述细胞聚集体还包含神经视网膜组织。

7.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述眼前段组织是角膜和/或晶状体。

8.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述细胞聚集体包含作为所述眼前段组织的部分结构的角膜上皮，并且还包含间充质组织或来源于其的角膜基质和/或角膜内皮。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述角膜上皮是分层的。

10.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，所述方法还包括从所述细胞聚集体分离所述眼前段组织或其部分结构或其前体组织。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述眼前段组织或其部分结构或其前体组织与神经视网膜组织一起分离。

12.通过根据权利要求1-9中任一项所述的方法获得的细胞聚集体，其中在所述细胞聚集体中Rx阳性并且Chx10阳性的神经视网膜外部上形成广谱细胞角蛋白阳性的非神经外胚层上皮组织。

13.通过根据权利要求1-9中任一项所述的方法获得的细胞聚集体，其包括构成所述细胞聚集体的表层的眼前段组织或其部分结构或其前体组织，和在所述细胞聚集体内部的神经视网膜组织，其中所述眼前段组织或其部分结构或其前体组织与Rx阳性并且Chx10阳性的所述神经视网膜组织相邻并且其中所述眼前段组织的前体组织是广谱细胞角蛋白阳性的角膜上皮前体组织和/或L-Maf阳性的晶状体基板。