[发明专利]制备眼前段组织的方法

说明书

本发明提供包含眼前段组织或其部分结构、或其前体组织的细胞聚集体的制备方法，所述方法包括：在骨形态发生因子信号转导途径激活物质存在下，悬浮培养多能干细胞聚集体，以诱导眼前段组织或其部分结构、或其前体组织的自组织。在一个实施方案中，所述骨形态发生因子信号转导途径激活物质是BMP4。在一个实施方案中，所述悬浮培养完全或部分地在成纤维细胞生长因子存在下进行。所产生的细胞聚集体可以进一步包含神经视网膜组织。

技术领域

本发明涉及用于在体外诱导多能干细胞分化成眼前段组织的技术。

背景技术

迄今为止，本发明人使用SFEBq方法(专利文件1)通过在不含血清的培养基中悬浮培养多能干细胞聚集体，并且通过体外自组织形成视杯(其是眼原基)(专利文件2，非专利文件1和2)已经成功地开发了包含来自多能干细胞的神经视网膜组织和视网膜色素上皮组织的视网膜前体组织。然而，通过体外悬浮培养由多能干细胞诱导与视网膜一起组成眼球的眼前段组织(如角膜、晶状体等)还未见报道。

非专利文件3报道了通过在PA6饲养层上贴壁培养人iPS细胞而诱导角膜上皮细胞。然而，在饲养细胞存在下的培养不是优选的，因为应当避免不确定因素的污染。另外，角膜等的立体结构还未被构建。该文件中所述的方法需要12周的长时期来诱导角膜上皮细胞。该文件还描述了BMP4处理抑制iPS细胞分化为角膜上皮细胞。

非专利文件4描述了通过在BMP4、BMP7和FGF2存在下贴壁培养人ES细胞来诱导晶状体前体细胞。非专利文件5描述了通过在PA6饲养层上贴壁培养小鼠iPS细胞而诱导角膜上皮。非专利文件6描述了通过在饲养细胞存在下贴壁培养人ES细胞而诱导角膜基质细胞。非专利文件7描述了通过贴壁培养将人ES细胞诱导为角膜样细胞。然而，这些文件无一公开悬浮培养多能干细胞来在空间上形成眼前段组织，如角膜、晶状体等。

[文件列表]

专利文件

专利文件1:WO 2009/148170

专利文件2:WO 2011/055855

[非专利文件]

非专利文件1:Nakano等人，Cell Stem Cell，10(6):771-785，2012

非专利文件2:Eiraku等人，Nature，472(7341):51-56，2011

非专利文件3:Hayashi等人，PLOS ONE，7(9):e45435，2012

非专利文件4:Yang等人，FASEB J.，24:3274-3283，2010

非专利文件5:Yoshida等人，PLOS ONE，6(12):e28856，2011

非专利文件6:Chan等人，PLOS ONE，8(2):e56831，2013

非专利文件7:Ahmad等人，Stem Cells，25:1145-1155，2007

发明概述

发明要解决的问题

本发明的一个目的是开发用于诱导多能干细胞选择性分化为眼前段组织或其前体组织的高度实用的方法。

解决问题的方式