[发明专利]S1P1受体激动剂的评价方法和筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及评价鞘氨醇-1-磷酸1(以下称为“S1P1”)受体激动剂的免疫抑制活性和心脏毒性的方法，以及筛选具有强的免疫抑制活性且心脏毒性低的S1P1受体激动剂的方法。

背景技术

众多的自身免疫疾病的结果是，由于异常的免疫应答，错误地识别自身的淋巴细胞增殖并活化，全身性地攻击自身或者攻击自身特定的组织而呈现症状，但是其原因多种多样且并未明确。迄今为止，以抑制淋巴细胞的增殖、活化的药剂为目标，各种免疫抑制剂逐渐被开发且进入临床应用，但是由非特异性的细胞增殖抑制活性、细胞毒性作用引起的副作用也不少，成为问题。

近年来，作为针对复发缓解型多发性硬化症的药剂而被认可的芬戈莫德(别名FTY-720)由于不是通过使淋巴细胞因细胞死亡而枯竭，而是通过控制其定位来调节免疫，因此作为具有新机制的药剂而受到瞩目。然而另一方面，对于芬戈莫德确认了包括心动过缓、房室传导阻滞(AV传导阻滞)等心律不齐在内的以心血管系统为中心的严重副作用，因而成为问题。(非专利文献1、非专利文献2)。

鞘氨醇-1-磷酸(以下称为“S1P”)的受体是存在于细胞膜上的G蛋白偶联型受体(GPCR)，被鉴定出有5种亚型受体(S1P1、S1P2、S1P3、S1P4、S1P5；别名为内皮分化基因EDG-1、EDG-5、EDG-3、EDG-6、EDG-8)。已知在生物体内磷酸化的芬戈莫德(FTY-p)与S1P1受体、S1P3受体、S1P4受体以及S1P5受体结合，作为激动剂发挥功能。

已知淋巴细胞经常消耗一定的时间在循环血液与淋巴组织中巡游，当从淋巴组织移动至循环血液中时，淋巴细胞膜上的S1P1受体发挥极其重要的作用。以FTY-p为代表的S1P1受体激动剂主要通过与淋巴细胞上的S1P1受体结合，将S1P1受体摄入细胞内而使淋巴细胞上的S1P1受体缺损。然后，由此将淋巴细胞隔离在二级淋巴组织而使循环淋巴细胞数目下降。其结果是S1P1受体激动剂发挥优异的免疫抑制活性(非专利文献2)。另一方面，从啮齿类的研究来看，考虑是通过刺激S1P3受体来显示心动过缓等心血管系统副作用(非专利文献3、4)，因此，正在研究减弱了对S1P3受体的作用的S1P1受体激动剂。

在这样的状况中，近年来报告了作为对S1P1受体和S1P5受体具有选择性的激动剂的BAF312(别名辛波莫德，Siponimod)的临床试验结果(非专利文献5)，其中作为副作用的心率降低作用和作为有效性的循环淋巴细胞数下降效果在相同用量下表现出来。因此，显示了仅仅通过分离对S1P3受体的作用不能在临床上分离心脏毒性，由芬戈莫德表现的心脏毒性作用的至少一部分是由对S1P1受体的激动剂刺激引起的毒性。

S1P1受体与抑制性Gα蛋白质(以下称为“Gαi”)偶联，在心脏中通过对受体的激动剂刺激而活化的Gαi与Gβγ一起使G蛋白偶联型内向整流型钾通道(以下称为“GIRK通道”)活化。由于在心脏中，GIRK1与GIRK4的复合体表达，因此考虑因为该激动剂刺激而产生AV传导阻滞、心率下降等心脏毒性(非专利文献5、6)。

关于作为对S1P受体的内源性激动剂的S1P的激动剂活性，报告了虽然根据评价法不同而会有一些不同，但是通常显示约10nM左右的50％活化浓度(EC50值)。另一方面，虽然S1P的一般健常人的血中浓度以数百nM这样EC50值的数十倍的高浓度存在，但是在一般健常人中并不诱发心脏毒性。进而，存在下述矛盾：显示同程度的EC50值的BAF312尽管与FTY-p同样地有效血中浓度为数十nM这样低的浓度，但是表现心脏毒性。

这样，S1P受体激动剂发挥作为其主作用的免疫抑制活性、作为其副作用的心脏毒性的机制目前尚未充分地阐明。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO2013/094761

非专利文献

非专利文献1：Science,296,346-349(2002)

非专利文献2：Journal of the American Society of Nephrology,13(4),1073-1083(2002)

非专利文献3：Journal of Biological Chemistry,279(14),13839-13848(2004)

非专利文献4：Molecular Pharmacology,58,449-454(2000)

非专利文献5：British Journal of Pharmacology,167,1035-1047(2012)