[发明专利]反义寡核苷酸组合物

权利要求书

1.一种反义寡核苷酸组合物，其可用于将反义寡核苷酸递送至细胞的胞质溶胶内，所述组合物包括：

一对部分互补的单链寡核苷酸，其中两条寡核苷酸杂交以给出至少一单链反义序列和至少一双链蛋白结合序列；

和穿梭蛋白，其能够运输遗传物质通过细胞膜的孔，所述穿梭蛋白包括识别双链蛋白结合序列并与之非共价地结合的核酸结合结构域；其中所述穿梭蛋白含有炭疽杆菌致死因子结构域I；以及

成孔蛋白，其为炭疽杆菌毒力因子保护性抗原PA83，

所述单链反义序列作为部分重叠的第二寡核苷酸链的侧翼，所述部分重叠的第二寡核苷酸链形成可结合至蛋白质的核酸结合结构域的结合位点。

2.根据权利要求1所述的组合物，其包括通过硫化而修饰以增加稳定性的寡核苷酸。

3.根据前述任一项权利要求所述的反义寡核苷酸组合物，其中所述蛋白结合序列为CGG-N₁₁-CCG，其中“N”为任意嘌呤碱基或嘧啶碱基。

4.根据权利要求1或2所述的反义寡核苷酸组合物，其中所述蛋白结合序列为：

5’-CGGCTGCTCTGATGCCG-3’或5’-CGGCATCAGAGCAGCCG-3’。

5.根据权利要求1或2所述的反义寡核苷酸组合物，其中所述炭疽杆菌致死因子的结构域的至少之一被所述核酸结合结构域代替。

6.根据权利要求1或2所述的反义寡核苷酸组合物，其中所述穿梭蛋白的所述核酸结合结构域为酿酒酵母GAL4。

7.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸组合物，其中所述反义序列为设计为与源自靶基因的信使RNA杂交的单链DNA。

8.根据权利要求7所述的反义寡核苷酸组合物，其中所述靶基因由病毒表达。

9.根据权利要求7或8所述的反义寡核苷酸组合物，其中所述靶基因由人乳头瘤病毒表达。

10.一种下调细胞的细胞溶胶中靶基因的表达的体外方法，所述方法包括递送权利要求1-9中任一项所述的反义寡核苷酸组合物，并且跨细胞的膜。

11.根据权利要求1、2、7或8任一项所述的反义寡核苷酸组合物，其用于医学治疗，并任选地另外包含选自由药学可接受的赋形剂和运载体组成的组的至少一种添加剂。

12.根据权利要求11所述的反义寡核苷酸组合物，其用于治疗感染人类乳头瘤病毒的患者。

13.根据权利要求11所述的反义寡核苷酸组合物，其用于癌症的治疗。

14.一种将反义寡核苷酸非共价地缀合至穿梭蛋白的方法，所述方法包括：

(i)提供两条部分互补的单链寡核苷酸，

(ii)将两条寡核苷酸杂交以形成寡核苷酸杂交体，其中所述杂交体包括至少一单链反义序列和至少一双链蛋白结合序列，

(iii)提供能够通过细胞膜的孔来运输遗传物质并具有识别所述双链蛋白结合序列的核酸结合结构域的穿梭蛋白，并且提供一个成孔蛋白，所述穿梭蛋白含有炭疽杆菌致死因子结构域I，所述成孔蛋白为炭疽杆菌毒力因子保护性抗原PA83，和

(iv)借助所述穿梭蛋白的所述核酸结合结构域和所述寡核苷酸杂交体的所述蛋白结合序列，将所述穿梭蛋白非共价地缀合至所述反义杂交体，

所述单链反义序列作为部分重叠的第二寡核苷酸链的侧翼，所述部分重叠的第二寡核苷酸链形成可结合至蛋白质的核酸结合结构域的结合位点。

15.根据权利要求3所述的反义寡核苷酸组合物，其中所述蛋白结合序列为：

5’-CGGCTGCTCTGATGCCG-3’或5’-CGGCATCAGAGCAGCCG-3’。