[发明专利]维持FcRn结合强度的免疫球蛋白Fc缀合物

说明书

技术领域

本发明涉及生理活性多肽-免疫球蛋白Fc片段缀合物，所述缀合物包括通过非肽 基连接体与具有FcRn-结合区域的免疫球蛋白Fc片段连接的生理活性多肽，并且能够维持 免疫球蛋白Fc片段内在结合亲和力；制备该缀合物的方法、维持该缀合物对FcRn的内在结 合亲和力的方法；以及包括该缀合物的组合物，所述组合物能够维持免疫球蛋白Fc片段对 FcRn的内在结合亲和力。

背景技术

已经对包含与蛋白质连接以增加蛋白质血清半衰期的载体——如聚乙二醇聚合 物、白蛋白、脂肪酸或抗体Fc(恒定区)——的蛋白质缀合物或复合物进行了各种研究。迄今 为止已知有关此类蛋白质缀合物或复合物的研究主要目的是增加药物的血清半衰期以缩 短给药间隔，从而提高患者方便性。然而，许多常规技术存在问题，如由于例如由治疗性蛋 白和载体蛋白之间的非特异性结合引起的空间位阻而使治疗性蛋白的活性降低。此外，在 可逆结合至血清白蛋白以增加其血清半衰期的脂肪酸缀合物的情况下，因为由于蛋白质和 脂肪酸之间的可逆结合而无法避免肾脏清除——导致蛋白质药物的最大损失，显著提高蛋 白质药物的血清半衰期是有限的。

而且，已经做出努力以利用免疫球蛋白片段增加包括蛋白质的生物活性物质的半 衰期。免疫球蛋白Fc的CH2-CH3区域包括延长抗体半衰期的FcRn(保护性受体)-结合位点。 FcRn是在血管内皮细胞中表达的MHCI类相关蛋白质，并且与IgG和白蛋白结合。典型地， IgG和FcRn在弱酸性pH下彼此紧密结合并且在中性pH下彼此解离。因此，当IgG通过胞饮作 用或内吞作用从血管进入血管内皮细胞并进入溶酶体(pH6.0)时，其受到FcRn保护而不被 降解。当IgG通过再循环与细胞膜融合时，其在pH7.4下与FcRn解离并且被释放到血管中。因 为该过程，包括FcRn-结合位点的IgG1、IgG2和IgG4的体内半衰期平均为3周，比其它蛋白质 的体内半衰期长。

因此，当免疫球蛋白Fc片段与生物活性物质连接时，可以通过FcRn-介导的再循环 增加生物活性物质的半衰期。对此，有必要开发出能够在生物活性物质和免疫球蛋白Fc片 段连接在一起时维持免疫球蛋白Fc片段对FcRn结合亲和力而不降低生物活性物质活性的 方法。

发明内容

技术问题

本发明人已作出大量努力来开发这样的缀合物，其能够维持免疫球蛋白Fc片段自 身对FcRn的内在结合亲和力而不降低生理活性多肽的活性，并且能够在中性pH下容易与 FcRn解离。结果，本发明人发现，包括通过非肽基连接体与具有FcRn-结合区域的免疫球蛋 白Fc片段连接的生理活性多肽的缀合物能够维持免疫球蛋白Fc片段对FcRn的内在结合亲 和力，同时，能够在7.4的中性pH下容易与FcRn解离，从而完成本发明。

技术方案

本发明的一个目的是提供包含通过非肽基连接体与包括FcRn-结合区域的免疫球 蛋白Fc片段连接的生理活性多肽的生理活性多肽-免疫球蛋白Fc片段缀合物，其中在pH6.0 下与FcRn结合的缀合物的量和在pH7.4下与FcRn结合的缀合物的量的结合比率在通过在用 于该缀合物的相同条件下测量免疫球蛋白Fc片段与FcRn结合的量而测定的比率的±6％范 围内。

本发明的另一个目的是提供包含通过非肽基连接体与包括FcRn-结合区域的免疫 球蛋白Fc片段连接的生理活性多肽的生理活性多肽-免疫球蛋白Fc片段缀合物，其中通过 将在pH6.0下与FcRn结合的缀合物的量和在pH7.4下与FcRn结合的缀合物的量代入下列等 式1而测定的结合比率在通过在用于该缀合物的相同条件下测量与FcRn结合的免疫球蛋白 Fc片段的量而测定的结合比率的±6％范围内：

等式1

结合比率(％)＝(在pH7.4下结合的量/在pH6.0下结合的量)×100。