[发明专利]应答羧胺三唑乳清酸盐的方法和多个信号转导通路的分子药效学生物标志物

说明书

本发明提供来自对象的细胞样品如生长期毛发中应答羧胺三唑乳清酸盐(CTO)的方法、应答羧胺三唑乳清酸盐(CTO)的多个信号转导通路的药效学生物标志物标签。在临床研究中，已证明CTO在具有不同基因组突变的数种癌症中的应答。本发明提供用于监测对CTO应答的诊断和预后分析，在生长期毛发分析中，与肿瘤抑制相关的数种转录标签的差异表达范围在‑100倍至+25倍，所述转录标签包括EGFR、MEK、HDAC、RAS、GFS、WNT、HSP90或非电压依赖性钙信号转导，同时诱导肿瘤抑制因子标签如P53或EGR1。

发明领域

本发明涉及在获自健康对象或具有不同疾病的患者的离体人生长期毛发中应答羧胺三唑乳清酸盐(CTO)的分子药效学标志物的评价。CTO是具有抗肿瘤活性的口服活性剂，其抑制非电压操纵式Ca²⁺通道，阻断Ca²⁺流入细胞和胞内储存Ca²⁺的释放，并且导致钙介导的信号转导的破坏和血管内皮生长因子(VEGF)信号转导、多种酪氨酸激酶信号转导(包括AKT、MEK-ERK或Bcr-Abl)的抑制。更具体地，本发明涉及通过对给予至患者的或被加入至离体培养的体外人生长期毛发中的CTO应答的转录组评估来评价总信号转导输出的分子药效学生物标志物。

发明背景

目前，新型癌症药物的发展基于对负责引发恶性肿瘤的基因的识别以及对它们所操纵的信号转导通路的阐明。旨在研发靶向疗法的小分子激酶抑制剂领域已有了极大的进展，靶向疗法被设计来干扰促使肿瘤生长的关键分子和信号转导通路，例如，(BCR-ABL)、(EGFR)、(EGFR)，以及针对潜伏期和临床发展的许多其他药剂。重要的是集中在药物代谢动力学和新陈代谢特性以及靶效能和分子选择性方面，以优化靶向疗法的效果(Collin,I and Workman，Cancer Signal TransductionTherapy，1：3-23(2006))。在激酶抑制剂的临床发展中，重要的是研发强大且有益的生物标志物，并且研发用于预测分子依赖性并且由此鉴定将得益于具体药剂的个体化药物治疗的患者的分析，以及耐药性发展的问题。

针对分子疗法发展的另一挑战是，很可能需要抑制数个致瘤靶标以便克服由若干异常导致的癌症，以及防止或压制耐药性的发展。在某些情况下，对药物的抗性可能与在肿瘤微环境中干扰所述药物的敏感性和功效的分子(例如，细胞因子、钙通道信号转导或分子信号转导)的产生增加有关。因此，即使最合理设想的药物分子可能会因下述原因失效：其靶向的靶标下游的突变性变化，或者绝不允许药物到达其靶标或者引起针对该药物分子的反馈机制的肿瘤新陈代谢特征。

当前存在几种用来克服耐药性的方法。一种方法是使用高度靶向性药剂的混合物(cocktails)，其根据具体癌症的分子组成来设计。另一方法是使用多靶向性激酶抑制剂(例如)。还有一种策略是，使用控制恶性肿瘤的许多致癌物和通路的若干激酶的抑制剂，例如，组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)和HSP90分子伴侣的抑制剂(Garon E.B等，MolCancer Ther.，12：890-900(2013)；和Witt O等，Cancer Letters 277：8-21(2009))。

针对引发具体癌症的致癌标志物的靶向药物的筛选和基于结构的设计，使得用于潜伏期和临床研究的靶向药物处于快速发展。然而，需要研究正常细胞中的信号转导通路，以更好地理解导致重要的肿瘤抑制蛋白(作为正常细胞功能的守门人(gatekeeper))失效的因素。需要更好地理解这些肿瘤抑制蛋白如何被调控，以防止应答应激信号时其正常信号转导的损失。

更具体地，重要的是研发能帮助正常细胞整合多个信号转导通路或提高它们作为守门人控制生长和增殖的作用的药物。例如，P53转录因子是主要的肿瘤抑制蛋白，其作为多细胞有机体的细胞命运守门人。在应答各种应激信号时P53被激活，并且通过涉及P53靶基因的反式激活的通路来启动细胞周期停滞、细胞衰老或细胞凋亡(Stambolic V等，MolCell：317-325(2001))。然而，在许多人类癌症中，这种遗传完整性的普遍保护作用被损坏。新范例是研发靶向维持正常细胞周期、生长和增殖的精确分子信号转导的药剂。