[发明专利]Fc结合性蛋白质、该蛋白质的制造方法和使用了该蛋白质的抗体吸附剂、以及使用了该吸附剂的抗体的纯化方法及识别方法有效

申请号：	201480051782.X	申请日：	2014-09-18
公开（公告）号：	CN105555801B	公开（公告）日：	2020-05-05
发明（设计）人：	朝冈義晴;田中亨;井出辉彦	申请（专利权）人：	东曹株式会社
主分类号：	C07K14/735	分类号：	C07K14/735;C07K1/22;C12N1/21;C12N15/09;C12P21/02
代理公司：	北京林达刘知识产权代理事务所(普通合伙) 11277	代理人：	刘新宇;李茂家
地址：	日本***	国省代码：	暂无信息
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摘要：
搜索关键词：	fc 结合蛋白质制造方法使用抗体吸附剂以及纯化识别
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【权利要求书】：

1.一种稳定性提高的Fc结合性蛋白质，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1中记载的氨基酸序列中第17位至第192位为止的氨基酸残基以及任选的位于细胞外区域的N末端侧的信号肽区域的全部或者一部分、和位于细胞外区域的C末端侧的细胞膜贯穿区域和细胞外区域的全部或者一部分，并且该第17位至第192位为止的氨基酸残基中SEQ ID NO.1的第35位的酪氨酸置换为天冬酰胺，和其中进一步加入选自(1)至(8)的置换的任一种：

(1)SEQ ID NO.1的第27位的缬氨酸置换为谷氨酸；

(2)SEQ ID NO.1的第27位的缬氨酸置换为谷氨酸，和SEQ ID NO.1的第75位的苯丙氨酸置换为亮氨酸；

(3)SEQ ID NO.1的第27位的缬氨酸置换为谷氨酸，和SEQ ID NO.1的第75位的苯丙氨酸置换为亮氨酸和SEQ ID NO.1的第121位的谷氨酸置换为甘氨酸；

(4)SEQ ID NO.1的第27位的缬氨酸置换为谷氨酸，SEQ ID NO.1的第75位的苯丙氨酸置换为亮氨酸，SEQ ID NO.1的第92位的天冬酰胺置换为丝氨酸，和SEQ ID NO.1的第121位的谷氨酸置换为甘氨酸；

(5)SEQ ID NO.1的第27位的缬氨酸置换为谷氨酸，SEQ ID NO.1的第54位的谷氨酸置换为天冬氨酸，SEQ ID NO.1的第75位的苯丙氨酸置换为亮氨酸，和SEQ ID NO.1的第121位的谷氨酸置换为甘氨酸；

(6)SEQ ID NO.1的第27位的缬氨酸置换为谷氨酸，SEQ ID NO.1的第54位的谷氨酸置换为天冬氨酸，SEQ ID NO.1的第75位的苯丙氨酸置换为亮氨酸，SEQ ID NO.1的第92位的天冬酰胺置换为丝氨酸，和SEQ ID NO.1的第121位的谷氨酸置换为甘氨酸；

(7)SEQ ID NO.1的第27位的缬氨酸置换为谷氨酸，SEQ ID NO.1的第54位的谷氨酸置换为天冬氨酸，SEQ ID NO.1的第75位的苯丙氨酸置换为亮氨酸，SEQ ID NO.1的第120位的谷氨酸置换为缬氨酸，和SEQ ID NO.1的第121 位的谷氨酸置换为甘氨酸；

(8)SEQ ID NO.1的第27位的缬氨酸置换为谷氨酸，SEQ ID NO.1的第54位的谷氨酸置换为天冬氨酸，SEQ ID NO.1的第75位的苯丙氨酸置换为亮氨酸，SEQ ID NO.1的第92位的天冬酰胺置换为丝氨酸，SEQ ID NO.1的第120位的谷氨酸置换为缬氨酸，和SEQ ID NO.1的第121位的谷氨酸置换为甘氨酸。

2.一种吸附剂，其是将权利要求1所述的Fc结合性蛋白质固定化于不溶性载体而得到的。

3.一种抗体的纯化方法，其使用了权利要求2所述的吸附剂。

4.一种具有糖链的抗体的纯化方法，其包括：

将包含具有糖链的抗体的溶液添加至权利要求2所述的吸附剂中并使该具有糖链的抗体吸附于该吸附剂的工序；和

使用洗脱液将吸附于所述吸附剂的具有糖链的抗体洗脱的工序。

5.一种识别方法，其通过使用权利要求2所述的吸附剂分离抗体，从而识别抗体所具有的糖链结构的差异。

6.一种抗体，其是用权利要求3或4所述的纯化方法得到的。

7.一种抗体的制造方法，其包含：用根据权利要求3或4所述的纯化方法进行纯化，并回收所得级分。

8.一种糖链的分离方法，其使用了权利要求2所述的吸附剂。

9.一种糖链，其是用权利要求8所述的分离方法得到的。

10.一种多聚核苷酸，其编码权利要求1所述的Fc结合性蛋白质。

11.一种表达载体，其包含权利要求10所述的多聚核苷酸。