[发明专利]Fc结合性蛋白质、该蛋白质的制造方法和使用了该蛋白质的抗体吸附剂、以及使用了该吸附剂的抗体的纯化方法及识别方法

说明书

本发明第一课题在于提供Fc结合性蛋白质的稳定性、特别是对于热、酸的稳定性提高了的Fc结合性蛋白质、该蛋白质的制造方法、以及使用了该蛋白质的抗体吸附剂。进而，第二课题在于提供能够识别对于抗体有无附加糖链的方法以及该方法中使用的材料。通过介由将人FcγRIIIa中的、细胞外区域中特定位点的氨基酸残基置换为其他特定的氨基酸而对于热、酸的稳定性提高了的Fc结合性蛋白质、该蛋白质的制造方法以及使用了该蛋白质的抗体吸附剂，解决了第一课题。进而，通过使用将人FcγRIIIa固定化于不溶性载体而得到的、能够特异地吸附具有糖链的抗体的吸附剂，解决了第二课题。

技术领域

本发明涉及对免疫球蛋白具有亲和性的Fc结合性蛋白质、使用了该蛋白质的抗体吸附剂、以及使用了该吸附剂的抗体的纯化方法和识别方法。更详细而言，本发明涉及对热、酸的稳定性高于野生型的Fc结合性蛋白质、该蛋白质的制造方法以及将该蛋白质固定化于不溶性载体而得到的抗体吸附剂。特别是，本发明涉及能够特异地吸附抗体中具有糖链的抗体的吸附剂、以及使用了该吸附剂的、具有糖链的抗体的纯化方法以及识别糖链有无附加于抗体的方法。

背景技术

Fc受体是与免疫球蛋白分子的Fc区域结合的一组分子。各个分子通过属于免疫球蛋白超家族的识别结构域，利用Fc受体上的识别结构域识别单一或相同组的免疫球蛋白同种型。由此决定免疫应答中何种辅助细胞起作用。Fc受体可进一步分类成几种亚型，有IgG(免疫球蛋白G)的受体即Fcγ受体、与IgE的Fc区域结合的Fcε受体、与IgA的Fc区域结合的Fcα受体等。另外，各受体更详细地分类，Fcγ受体有FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb和FcγRIIIa、FcγRIIIb的存在被报导(非专利文献1：Takai.T.，Jpn.J.Clin.Immunol.，28，318-326，2005)。

Fcγ受体中，FcγRIIIa存在于自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞等细胞表面，是人免疫机构中参与十分重要的ADCC(抗体依赖性细胞损伤)活性的重要的受体。有报导称，该FcγRIIIa与人IgG的亲和性为表示结合强度的结合常数(KA)为107M-1以下(非专利文献2：J.Galon等，Eur.J.Immunol.，27，1928-1932，1997)。人FcγRIIIa的氨基酸序列(序列号1)被UniProt(Accession number：P08637)等公共数据库发布。另外，对于人FcγRIIIa的结构上的功能结构域、用于贯穿细胞膜的信号肽序列、细胞膜贯穿区域的位置，也同样被发布。图1表示人FcγRIIIa的结构示意图。需要说明的是，图1中的氨基酸号对应于序列号1中记载的氨基酸号。即，序列号1中的第1位的甲硫氨酸(Met)至第16位的丙氨酸(Ala)为止为信号序列(S)；第17位的甘氨酸(Gly)至第208位的谷氨酰胺(Gln)为止为细胞外区域(EC)；第209位的缬氨酸(Val)至第229位的缬氨酸(Val)为止为细胞膜贯穿区域(TM)以及第230位的赖氨酸(Lys)至第254位的赖氨酸(Lys)为止为细胞内区域(C)。需要说明的是，已知FcγRIIIa与IgG1至IgG4的人IgG亚类中特别是IgG1和IgG3强结合、而与IgG2和IgG4的结合弱。

另一方面，近年来，利用单克隆抗体所具有的特异性的药物(抗体药物)的开发有所进展。已知，报导了在抗体药物中所使用的人IgG中，根据Fc区域的第297位的天冬酰胺残基上附加的N型糖链的差异，ADCC(抗体依赖性细胞损伤)活性变化，特别是用去除了作为糖链的一种的岩藻糖的抗体，ADCC活性提高(非专利文献3：Shinkawa.T.，J.Biol.Chem.，278，3466-3473，2003)。即，抗体药物中，抗体所具有的糖链结构具有重要的意义。然而，抗体药物通常是使用以动物细胞作为宿主的基因重组技术而制造的，难以控制在宿主内附加于抗体的糖链。另外，对制造的抗体的糖链进行分析需要很多时间和劳力。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1:Takai.T.，Jpn.J.Clin.Immunol.，28，318-326，2005