[发明专利]经处理的滤器

说明书

相关申请

该国际申请要求2013年10月7日提交的欧洲申请号13187628的优先权，其 全文通过引用纳入本文。

发明领域

本发明涉及一种过滤包含蛋白质的流体的方法。本发明还涉及用于该方法 的经处理的滤器和由该方法得到的滤液。

背景技术

在蛋白质物质的加工期间，通常需要使用过滤步骤。这一过滤步骤能够去 除将对最终产物不利的组分。例如，通过选择合适孔径的滤器，可能从病毒颗 粒的大聚集体中分离游离的、完整病毒颗粒。

EP0188104B1描述了通过装置如含有滤器的心切开术储器过滤血液产品。 已经用聚山梨酯80处理滤器，其改善了通过装置的血液的重力流。然而，该技 术限于血液过滤并且没有公开纯化治疗性蛋白质，如用于疫苗的病毒蛋白质或 病毒粒子。EP0188104并没有使用过滤来从感兴趣的蛋白质中去除大蛋白质聚 集体。此外，EP0188104需要在使用之前干燥滤器，这在本发明中不需要。

WO/2011/051235描述了加入叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(TRITON)以增加流感疫苗制造中的过滤性能。然而，在WO/2011/051235中，曲通加入病毒制备物中而不是用于预处理滤器。此外，在WO/2011/051235中，是在裂解之后和灭活之前加入。在本发明的情况中，优选在裂解之前使用经去污剂处理的滤器。

发明内容

在病毒产品的制备中，蛋白质物质的过滤、产物无菌性和安全性是关 键的。采用灭活步骤来杀死感染性物质。通常，灭活剂，如甲醛通过诱导 蛋白质物质的交联来杀死感染性复制机构，也可能产生聚集的蛋白质。已 经发现过滤包含蛋白质物质的流体是远远不够的。例如，尽管进行过滤和 纯化步骤，仍观察到所需产品的量的明显减少，即使在预期蛋白质物质的 粒度容易通过滤器时亦是如此。

发明人已经确定可通过在包含蛋白质物质的流体过滤之前或期间处理 滤器来避免感兴趣的生物产品(例如，蛋白质物质)的这种意料之外的损 失。具体地，已经意外地发现，与对照即其他等同条件下未处理的膜滤器 相比，用表面活性剂预处理的膜滤器可导致感兴趣的生物产品回收率得到 令人惊讶的改善。

因此，本发明提供了一种从包括大聚集体杂质的混合物中纯化生物产 品，如蛋白质的方法。按照本发明，生物产品经过滤通过具有截留大蛋白 质聚集体杂质的尺寸的合适过滤膜。用降低感兴趣的生物产品与滤膜的结 合的表面活性剂预处理疏水性滤器。

可通过本发明过滤的生物产品包括抗体、血液产品、病毒蛋白质和多 糖。

附图说明

图1显示了在过滤通过未处理的滤器之后流感病毒的各毒株的蛋白质 损失百分比。

图2显示了正通过未处理的滤器的流感病毒的各毒株的流速与时间的 变化。

图3显示了在用未处理的滤器过滤之前和之后流感病毒毒株的粒度分 布。

图4显示了相对于用未处理的滤器过滤，按照本发明的处理滤器产生 的回收病毒产率的增加。

图5显示了用各种磷酸盐缓冲盐水冲洗体积去除的聚山梨酯80(吐温) 的量。

图6显示了相对于经聚山梨酯80(吐温)处理的滤器，用经磷酸盐缓 冲盐水溶液处理的滤器过滤时病毒损失百分比。

具体实施方式

在一个方面中，本发明涉及从大蛋白质聚集形成的杂质中纯化感兴趣 的生物产品的方法。因此，在一些实施方式中，提供了含有至少一种感兴 趣的生物产品的样品(例如，流体)中去除聚集体的方法。

按照本发明，该方法包括使用合适的膜滤器，该膜滤器已经用表面活 性剂，例如表面活性剂溶液预处理以提供经预处理的膜滤器。如本文中更 详细的描述，经预处理的膜滤器一般不在该步骤之后干燥。可任选地用合 适的缓冲液或水洗涤经预处理的膜滤器以在过滤步骤之前从膜滤器中去除 过量(例如，未结合)的表面活性剂。一旦获得并任选地洗涤经预处理的 膜滤器，然后使用经预处理的膜滤器过滤含感兴趣的生物产品的样品(例 如，流体样品)。感兴趣的生物产品通过经预处理的膜滤器过滤并收集为 滤液。该步骤从样品中去除不需要的大聚集体。