[发明专利]用于抗体表达的双顺反子表达载体以及用其生产抗体的方法

权利要求书

1.一种用于抗体表达的表达载体，包含：

(i)第一表达盒，包含“启动子-非翻译区(UTR)-内含子-抗体轻链基因-polyA”；和

(ii)第二表达盒，包含“启动子-UTR-内含子-抗体重链基因-内部核糖体进入位点 (IRES)-扩增基因-polyA”。

2.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子选自下组：猿病毒40(SV40) 早期启动子、巨细胞病毒(CMV)启动子和人延长因子1-α(hEF1-α)启动子。

3.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述UTR衍生自CMV。

4.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述内含子衍生自CMV。

5.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子是SV40早期启动子，而所述 UTR和内含子衍生自SV40。

6.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子是CMV启动子，而所述UTR和 内含子衍生自CMV。

7.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子是hEF1-α启动子，而所述UTR 和内含子衍生自hEF1-α。

8.如权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述启动子是由SEQIDNO:1所示核苷 酸序列构成的CMV启动子。

9.如权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述UTR衍生自CMV，由SEQIDNO:2所示 核苷酸序列构成。

10.如权利要求5所述的表达载体，其特征在于，所述内含子由SEQIDNO:3所示的核苷 酸序列构成。

11.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述扩增基因是谷氨酰胺合成酶(GS) 或二氢叶酸还原酶(DHFR)。

12.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述抗体是贝伐单抗、托珠单抗、狄诺 塞麦、贝利单抗、戈利木单抗、优特克单抗或易普利姆玛。

13.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体包含选自下组的切割谱： 图5所示的pCYB204IG的切割谱、图6所示的pCYB204ID的切割谱、图8所示的pCYBBSS001的切 割谱、图9所示的pCYBBSS002的切割谱、图10所示的pCYBBSS003的切割谱、图11所示的 pCYBBSS004的切割谱、图12所示的pCYBBSS005的切割谱和图13所示的pCYBBSS006的切割 谱。

14.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述抗体轻链基因由选自下组的核苷 酸序列构成：SEQIDNO:11、SEQIDNO:15、SEQIDNO:19、SEQIDNO:23、SEQIDNO:27、 SEQIDNO:31和SEQIDNO:35。

15.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述抗体重链基因由选自下组的核苷 酸序列构成：SEQIDNO:12、SEQIDNO:16、SEQIDNO:20、SEQIDNO:24、SEQIDNO:28、 SEQIDNO:32和SEQIDNO:36。

16.一种动物细胞，用权利要求1-15中任一项所述的表达载体转染。

17.如权利要求16所述的动物细胞，其特征在于，所述动物细胞是中国仓鼠卵巢(CHO) 细胞。

18.一种产生抗体的方法，包括培养权利要求16所述的动物细胞。

19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，还包括在培养所述动物细胞的培养产物中 纯化所述抗体。

20.如权利要求18或权利要求19所述的方法，其特征在于，所述抗体是贝伐单抗、托珠 单抗、狄诺塞麦、贝利单抗、戈利木单抗、优特克单抗或易普利姆玛。