[发明专利]可来源于血小板浓缩液的生物活性组合物及其制备和使用方法

说明书

技术领域

本发明一般涉及来源于动物血小板产品的生物活性物质及其制备和使用方法 的领域。

背景技术

用于治疗处理的细胞或含有细胞的组合物的施用正在成为日益流行的治疗方 式。这样的治疗可以包括，例如，施用具有分化成包括例如骨、脂肪、软骨和肌 肉的间叶细胞谱系细胞的潜能的间充质干细胞(MSC)。

为了获得治疗量的用于移植的细胞，经常需要从原始群体扩增细胞群体。用于 扩增细胞群体的培养基为细胞代谢、生长和增殖提供必需营养物。经常使用胎牛 血清(FBS)作为促进群体扩增的补充剂。因为FBS的低含量抗体，因为FBS包 含刺激细胞生长和增殖的许多生长因子以及因为FBS的制造相对便宜，所以FBS 一直是优选的补充剂。然而，FBS具有公认的缺点，包括病原体的传播风险，如 牛海绵状脑病。

人血小板裂解物(hPL)已作为FBS的潜在的、非异种替代品出现。hPL来源 于已知含有多种生长因子的血小板。除了生长因子外，目前的hPL分离技术通常 还产生保留了高浓度的纤维蛋白原(一种参与凝块形成的糖蛋白)的组合物。因 为它们的纤维蛋白原含量和形成凝块的倾向，目前的商业hPL组合物经常与一种 或多种抗凝添加剂，典型地肝素一起使用。hPL中的抗凝添加剂增加了hPL生产 和/或使用的成本，并且在肝素的生物活性是有害的情况下，可能会存在问题。此 外，虽然已经提出了多种用于生产hPL的方法，但是实现hPL产品的目标组成分 布或生物活性的尝试经常导致工艺复杂性和/或密集设备要求。作为FBS的替代品 的hPL的广泛采用将需要经济上可行的方法，但是该方法产生所期望的且有效的 组合物。

鉴于这样的背景，需要基本上不含纤维蛋白原，保留了对细胞增殖有益的生长 因子并可以容易地且经济地制造的人血小板裂解物组合物。

发明内容

在本发明的某些方面，已经发现，从血源性血小板浓缩液(优选人)中可以独 特地处理有利的血源性血小板浓缩液的生物活性级分。生物活性级分可以具有存 在于起始浓缩液中的生长因子和/或其它物质的新的组成分布，并且处理方法可以 涉及凝结和分离浓缩液级分的新技术和/或新的用来澄清来源于浓缩液的液体级分 的深层过滤操作。

在一个方面，用于处理血小板裂解物组合物的方法包括如下步骤：裂解含有血 小板和血浆的人血源性浓缩液的血小板以形成裂解的血小板制备物，通过将裂解 的血小板制备物中的纤维蛋白原转化为纤维蛋白形成凝块凝胶，以及压榨凝块凝 胶以从凝块凝胶中压出液体。

在另一个方面，方法包括使血源性血小板浓缩液的液体生物活性级分通过至少 第一深层过滤器，以便从生物活性级分中除去悬浮固体，所述血源性血小板浓缩 液的液体生物活性级分包含血小板浓缩液的天然组分，包括纤维蛋白原、白蛋白、 球蛋白，和TGF-β1、EGF、FGF-β、PDGF-AA、PDGF-BB、SDF-1α及VEGF中 的至少一种，任选地全部，其中纤维蛋白原以低于20,000ng/mL的含量存在。血小 板浓缩液优选是人血小板浓缩液。在优选的方式中，液体生物活性级分通过第一 深层过滤器，还通过第二深层过滤器，其中第二深层过滤器任选具有比第一深层 过滤器小的公称微米等级。

在另一个方面，提供了包含人血源性血小板浓缩液的生物活性级分的组合物， 该血小板浓缩液含有人血小板和人血浆，该生物活性级分包含血小板浓缩液的天 然组分，包括纤维蛋白原、白蛋白、球蛋白、TGF-β1、EGF、FGF-β、PDGF-AA、 PDGF-BB、SDF-1α和VEGF。生物活性级分可具有以低于约20,000ng/mL的含量 存在，例如在约500ng/mL至约20,000ng/mL范围内的纤维蛋白原，和/或生物活 性级分或含有它的细胞培养基可以不含或基本上不含所添加的肝素(即，非原产 于血小板浓缩液起始原料的肝素)。生物活性级分可以具有如本文所公开的生长因 子含量或比例。在某些实施方案中，生物活性级分是液体生物活性级分，并且天 然组分包括：

含量低于20,000ng/mL液体生物活性级分，例如在约500ng/mL至约 20,000ng/mL液体生物活性级分范围内的纤维蛋白原；

含量为至少2mg/dL液体生物活性级分的白蛋白；

含量为至少1g/dL液体生物活性级分的球蛋白；

含量为至少5000皮克/毫升(“pg/mL”)液体生物活性级分的TGF-β1；