[发明专利]用于增殖病毒的方法

权利要求书

1.一种用于增殖和分离正呼肠孤病毒的体外方法，所述方法包括在有核鱼红细胞中体 外增殖和分离所述正呼肠孤病毒。

2.根据权利要求1所述的体外方法，其中，所述正呼肠孤病毒是感染鱼的正呼肠孤病 毒。

3.根据权利要求1或2所述的体外方法，其中，所述正呼肠孤病毒在有核红细胞中复制。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的体外方法，其中，所述正呼肠孤病毒是鱼呼肠孤病 毒(PRV)。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的体外方法，其中，所述有核鱼红细胞是鲑科红细 胞。

6.根据权利要求5所述的体外方法，其中，所述鲑科是鲑鱼或虹鳟鱼。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的体外方法，所述方法包括以下步骤：

a)共培养基本上不含正呼肠孤病毒的有核鱼红细胞与正呼肠孤病毒感染的有核鱼红 细胞和/或包含正呼肠孤病毒源的任何其他物质以得到混合培养物；

b)温育步骤a)中得到的所述混合培养物，

c)从步骤b)的所述混合培养物中除去正呼肠孤病毒感染的红细胞，

d)可选地重复步骤a)至c)的操作，和

e)从步骤c)的所述红细胞中分离正呼肠孤病毒。

8.根据权利要求7所述的体外方法，其中，步骤b)的所述温育进行约14天或更长时间， 诸如约4-45天。

9.根据权利要求7-8中任一项所述的体外方法，其中，将步骤a)至d)的操作重复至少2 次，诸如约2-10次。

10.一种制备疫苗组合物的体外方法，所述方法包括权利要求1-9中任一项所述的方 法，随后是灭活步骤e)中得到的分离的正呼肠孤病毒，以及此后制备包含灭活的所述正呼 肠孤病毒的疫苗组合物。

11.根据权利要求10所述的体外方法，其中，所述正呼肠孤病毒是鱼呼肠孤病毒(PRV) 且所述疫苗组合物用于治疗和/或预防心脏和骨骼肌炎症(HSMI)。

12.一种用于诊断鲑科物种鱼中的正呼肠孤病毒感染或PRV病毒存在的体外方法，所述 方法包括：

a)从来自所述鲑科物种鱼的生物血样中分离红细胞，

b)检测从步骤a)得到的所述红细胞中正呼肠孤病毒的存在。

13.根据权利要求12所述的体外方法，其中，所述正呼肠孤病毒是鱼呼肠孤病毒(PRV)。

14.根据权利要求12-13中任一项所述的体外方法，其中，所述检测通过RT-qPCR进行。

15.根据权利要求12-14中任一项所述的体外方法，其中，所述鲑科是鲑鱼。

16.有核鱼红细胞用于增殖正呼肠孤病毒的用途。

17.根据权利要求16所述的用途，其中，所述正呼肠孤病毒是感染鱼的正呼肠孤病毒。

18.根据权利要求16或17所述的用途，其中，所述正呼肠孤病毒在有核红细胞中复制。

19.根据权利要求16-18中任一项所述的用途，其中，所述有核鱼红细胞是鲑科红细胞。

20.根据权利要求16-19中任一项所述的用途，其中，所述鲑科是鲑鱼。

21.根据权利要求16-19中任一项所述的用途，其中，所述鲑科是虹鳟鱼。